Можно ли с лямблиями в садик: Можно ли посещать детский сад при лямблиозе и какие противопоказания к этому?

Можно ли посещать детский сад при лямблиозе и какие противопоказания к этому?

Лямблиоз – заражение организма микроскопическими паразитами лямблиями. Может возникать как у детей, так и у взрослых. Оно очень широко распространено, но может никак не проявляться и обнаруживаться случайно при проведении обследования с другой целью. Чаще всего оно встречается у малышей. Потому иногда родителям приходится задаваться вопросом, можно ли посещать детский сад при лямблиозе? Тем более, что некоторые дошкольные учреждения выносят неформальный запрет на посещение детьми, зараженными паразитами.

Правовая основа

В некоторых случаях медицинские работники в детском саду могут запретить ребенку, зараженному лямблиями, посещать учреждение. Этот запрет делается во избежание широкого распространения паразита среди воспитанников, а также сотрудников. Однако правовых основ такой запрет не имеет. Не существует нормативных документов, в которых бы прописывался запрет на посещение детского учреждения дошкольниками, зараженными паразитами. Таким образом, родитель может игнорировать запрет.

Кроме того, нет необходимости уведомлять детский сад о наличии заражения. Но иногда родители вынуждены это сделать. Например, в тех случаях, когда лямблиоз протекал параллельно с другим заболеванием, по которому дается, например, отвод от прививок. В этом случае медработнику дошкольного учреждения необходимо предоставить выписку, а в ней может быть указан и диагноз «Лямблиоз». Также родителям приходится уведомлять медработников тогда, когда ребенку необходимо в течение дня принимать лекарства от заражения.

Иногда лечение бывает достаточно длительным. Тогда ограничить посещение детского сада невозможно. В этом случае, при условии нормального самочувствия ребенка, он может посещать детский сад и принимать необходимые лекарства там.

к содержанию ↑

Самочувствие ребенка

Хотя ребенку, зараженному лямблиями, посещать дошкольное учреждение можно, в некоторых случаях его лучше оставить дома. Например, в период, когда симптоматика выражена особенно сильно. Иногда при лямблиозе в остром протекании проявляются следующие признаки:

1. Тошнота, вплоть до рвоты, может быть периодической, а временами – частой;
2. Боли в животе сильные или не слишком выраженные;
3. Диарея, мягкий стул зеленоватого цвета, водянистый, с примесью крови;
4. Изменение вкусовых ощущений, и как результат, отказ от пищи и быстрая потеря веса.

Если данная симптоматика выражена значительно и ребенок чувствует себя плохо, то с лямблиями в сад ходить не стоит. Хотя после снятия тяжелой симптоматики дошкольное учреждение снова можно посещать. Чем младше заболевший, тем более выраженным может быть плохое самочувствие и тем опаснее само заболевание. Потому малышей 3-4 лет лучше оставлять дома, но если речь о 5-6-ти летних дошкольниках, то им посещение сада не повредит.

При хроническом протекании заболевания у ребенка может проявляться сильная слабость, быстрая утомляемость, признаки интоксикации. Это происходит потому, что паразиты нарушают всасываемость полезных веществ в желудке. В этом состоянии ребенку также может быть сложно посещать учреждение и его лучше оставить дома.

Если же заболевание было выявлено случайно и никакой симптоматики не проявляется, то оснований для того, чтобы оставить дошкольника дома, нет. Кроме того, при отсутствии у малыша острой симптоматики, из-за которой ему бы требовался постоянный уход, больничный лист родителю врач также открыть не может.

к содержанию ↑

Вероятность заражения

Одна из главных причин, почему сотрудники детского учреждения просят родителей оставить зараженных малышей дома – вероятность заражения других дошкольников, а также персонала учреждения паразитами. Именно поэтому некоторым родителям приходится задаваться вопросом, можно ли посещать детский сад с кишечными паразитами.

Возбудитель

Характер передачи инвазии исключительно фекально-оральный. То есть человек должен проглотить некоторое количество цист паразита. А цисты содержатся только в кале зараженного человека (могут переноситься на другие поверхности на руках). То есть, если речь идет о дошкольниках 5-6 лет, которые обучены начальным правилам гигиены, то вероятность передачи инвазии невысока.

Кроме того, важно помнить, что лямблиоз почти всегда протекает бессимптомно. И у большинства людей, как малышей, так и взрослых, он выявляется случайно. При этом заболевание настолько распространено, что встречается почти у 50% людей всех возрастов. Таким образом, крайне велика вероятность того, что группу уже посещает зараженный, а возможно и не один, просто диагноз еще не поставлен. Потому с этой точки зрения запрет на посещение сада дошкольником с лямблиями является бессмысленным.

к содержанию ↑

Видео

←Предыдущая статьяМогут ли лямблии вызывать аллергию и каковы механизмы ее развития?
Следующая статья →Как помогает немозол при лямблиозе?

Лямблии у ребенка — Мамусик.ру

Лямблии: вопросы и ответы

ВАЖНО!

Информацию из данного раздела нельзя использовать для самодиагностики и самолечения. В случае боли или иного обострения заболевания диагностические исследования должен назначать только лечащий врач. Для постановки диагноза и правильного назначения лечения следует обращаться к Вашему лечащему врачу.

Вопросы посетителей и ответы специалистов на сайте интернет-клуба ИНВИТРО.

Добрый день! У моей дочери дисбактериоз (судя по аназизам). Врач назначила пить аципол, но толку что-то мало. У меня подозрения, может у дочери есть какие-то паразиты в организме. Скажите, на какие паразиты нужно сдать, чтобы хоть это исключить. ребенка переодически высыпает, от аципола толку чуть. Спасибо

Уважаемая Ольга! Для диагностики паразитов  рекомендую Вашей дочери выполнить анализ кала на лямблии (тест №483), анализ крови на глистные инвазии (тесты №№ 229, 230, 232, 235, 237) и маркёр аллергии (тест №67), биохимию крови (профили №73 и №74). Более подробную информацию о ценах на исследования и подготовке к ним можно узнать на сайте Лаборатории ИНВИТРО в разделах: «Анализы и цены» и «Профили исследований», а также по телефону 363-0-363 (единая справочная Лаборатории ИНВИТРО). Для определения дальнейшей тактики рекомендуем Вам обратиться к педиатру.

Доброго времени суток! Возраст — 27 лет. В последние полгода беспокоят частые расстройства желудка, избыточное газообразование, урчание в животе. Хроническое заболевание — гастродуоденит. Есть подозрения на дисбактериоз кишечника и наличие паразитов (включая лямблиоз). Какие анализы порекомендуете сдать? Спасибо.

Уважаемая Светлана! Рекомендую выполнить общий анализ кала (тест №158), анализ кала на дисбактериоз с определением чувствительности к бактериофагам (тесты №№ 456, 443), анализ кала на антиген лямблии и хеликобактер — пилори (тесты №№ 483, 484), анализ крови на хеликобактер — пилори (тесты №№ 133, 177).  Более подробную информацию о ценах на исследования и подготовке к ним можно узнать на сайте Лаборатории ИНВИТРО в разделах: «Анализы и цены» и «Профили исследований», а также по телефону 363-0-363 (единая справочная Лаборатории ИНВИТРО). Для определения дальнейшей тактики рекомендуем Вам обратиться к гастроэнтерологу.

Здравствуйте. Сдал в вашей клинике анализ крови на лямблиоз — реакция положительная. Нужно ли делать повторный анализ(сдавать кал)? Если раньше уже были лямблии, но вылечился от них. На сколько можно верить результатам анализа крови? Чем лучше лечиться от лямблий??

Уважаемый Антон! Наличие антител к лямблиям говорит о перенесённой или текущей инвазии. Для уточнения диагноза рекомендую выполнить анализ кала на определение антигена возбудителя (тест №483). Для определения дальнейшей тактики рекомендуем Вам обратиться к гастроэнтерологу.

Здравствуйте. Подскажите пожалуйста, у ребенка высыпала сыпь, вызвали скорую, нам поставили диагноз крапивница, вкололи дексометазон (после укола сыпь прошла минут через 40), сказали сдать кровь на IgE. сдали на след. день у вас в лаборатории, показатель 397(норма до 90 по ее возрасту), пересдали еще через неделю -показатель 255. Все это время мы пили фенистил. Нужно ли дополнительно сдать анализы на наличие паразитов (лямблии, глисты, аскариды…) в организме (ведь высокий уровень IgE также может говорить о наличии паразитов в организме) или нет смысла, так как уровень иммуноглобулина понижается на фоне принятия антигистаминных препаратов? Заранее спасибо.

Уважаемая Татьяна! Если контакт с аллергеном продолжается, то уровень иммуноглобулина Е (общего и специфического) будет оставаться высоким даже на фоне приема антигистаминных препаратов. Для выявления причины аллергической реакции рекомендую выполнить ребенку анализ крови на бытовые аллергены (профиль №98), пищевые аллергены (с учетом употребляемых продуктов), паразитарные инвазии (тесты №№ 229, 230, 232, 237), анализ кала на антиген лямблий (тест №483). Более подробную информацию о ценах на исследования и подготовке к ним можно узнать на сайте Лаборатории ИНВИТРО в разделах: «Анализы и цены» и «Профили исследований», а также по телефону 363-0-363 (единая справочная Лаборатории ИНВИТРО). Для определения дальнейшей тактики рекомендуем Вам обратиться к аллергологу.

Здравствуйте! Старшей в ноябре будет 5лет, а младшей в декабре будет 4года. С прошлого года как пошли в садик начали болеть простудными заболеваниями каждый месяц. Летом сдали анализы: кровь из вены на лямблии, хламидию пневмонии,аллергию. Результаты: лямблии отрицательно у обеих, Ig M отрицательно и пок. коэф.Ig G 1,3 у обеих, Ig E 171 у младшей, 91 у старшей. Сейчас жалобы на самочуствие у старшей-кашель: 2 дня есть, потом исчезает на пару дней, начинается именно в садике. Назначили пить кетотифен обеим. Я не могу понять из ответов врача есть ли у нас хламидии и может ли кашель быть на нервной почве, потому что садик переносят обе очень плохо? Заранее спасибо, надеюсь подскажите как мне быть! Юлия.

Уважаемая Юлия! Результат анализа указывает на отсутствие активной хламидийной инфекции у девочек, а повышенный уровень общего IgE  свидетельствует об аллергической их сенсибилизации к какому-либо аллергену. Для определения дальнейшей тактики рекомендую обратиться к аллергологу и педиатру.

Анализ крови (сумарные антитела) показал наличие лямблий1,32++., аскариды-1.(гемотест) Кал на наличие цист лямблий -не обнаружено,аскариды-обнаружены, (30 детская поликлиника).Беспокоил ребенка(6л) жидкий стул, отсутствие аппетита . Пил вермокс,нимазол-ч/з 14 дней.Т.к обнаружить цисты лямблий довольно труднов в кале,то стоит такой вопрос- делаете ли в лаборатории анализ кала на лямблии в консервант Турдыева.А также хотим сдать в Вашей лаборатории кал на лямблии антиген-что он покажет?Не является ли этот анализ повторением анализа крови на сумарные антитела .

Анализ кала на лямблии не является аналогом анализа крови на суммарные антитела. При исследовании кала определяются антигены самого возбудителя, а не антитела к ним (тест №483). Более подробную информацию о ценах на исследования и подготовке к ним можно узнать на сайте Лаборатории ИНВИТРО в разделах: «Анализы и цены» и «Профили исследований», а также по телефону 363-0-363 (единая справочная Лаборатории ИНВИТРО). С результатами обследования обратитесь к инфекционисту.

Добрый день! Около 3 месяцев держится субфебрильная температура 37-37,3. Была у терапевта, сдавала общий анализ крови, мочи, которые никаких отклонений не показали. Анализы на ВИЧ, гепатиты, сифилис, torch-инфекции тоже отрицательные. В последнее время часто жидкий стул, боли в животе. Пожалуйста, подскажите, какие анализы нужно сдать для оценки состояния желудка и кишечника? Пол женский, 23 года. Раньше никаких заболеваний, связанных с кишечником, не было. Спасибо!

Уважаемая Ирина! В Вашем случае рекомендую выполнить биохимический анализ крови (профили №73 и №74, тесты №№ 12, 18, 23), общий анализ кала (наш тест №158), анализ кала на дисбактериоз с определением чувствительности к бактериофагам (тесты №№ 456, 443), анализ кала на лямблии (тест №483), анализ кала на панкреатическую эластазу (тест №162ПЭ1). Более подробную информацию о ценах на исследования и подготовке к ним можно узнать на сайте Лаборатории ИНВИТРО в разделах: «Анализы и цены» и «Профили исследований», а также по телефону 363-0-363 (единая справочная Лаборатории ИНВИТРО). Для определения дальнейшей тактики рекомендуем Вам обратиться к гастроэнтерологу.

Здравствуйте! Моей дочери (7 лет) почти год назад был поставлен диагноз бронхиальная астма 1 степени. 2 недели лечения в аллергоцентре результата практически не дали, ребенок был выписан с хрипами, слышимыми дистанционно и кашлем. Клинические анализы по словам лечащего врача были в норме, IG E =800. В апреле было подряд 2 бронхита с обструкцией. Применяли ровамицин, эриус, бронхолитин. В мае ездили в санаторий, прошли курс физиопроцедур. Анализы и спирограмма в норме. На данный момент состояние нормальное, периодически закладывает нос (выделений нет). С момента постановки диагноза соблюдаем строгую диету, убрали ковры, заменили подушки и одеяла. До года у ребенка была аллергия на коровье молоко, давала детскую смесь на основе сои. В семье аллергическими заболеваниями никто не страдает.Вопрос: Имеет ли смысл сделать аллергопробы по крови(метод ИФА)? насколько информативен этот анализ? Возможен ли вариант, что по всем аллергенам результат буде +-? Спасибо.

Уважаемая Татьяна! Уровень иммуноглобулина Е говорит о постоянном аллергостатусе ребёнка и его контактах с аллергенами. Наиболее частой причиной возникновения повышенной сенсибилизации организма ребёнка является паразитарная инвазия, в частности аскариды, способные мигрировать в бронхиальное дерево, обуславливая бронхоспазм, а также лямблии и токсокары, вызывающие выраженные аллергические реакции. Пищевая аллергия часто ассоциирована с заболеваниями органов желудочно-кишечного тракта. Учитывая всё вышесказанное, рекомендую Вашему ребёнку выполнить анализ крови на глисты (наши тесты №№ 229, 230, 232, 234, 237), общий анализ кала (тест №158), анализ кала на дисбактериоз с определением чувствительности к бактериофагам (тесты №№ 456, 443), анализ кала на панкреатическую эластазу (тест №162ПЭ1). Для выявления аллергенов и их устранения рекомендую также провести аллергодиагностику (профиль №98 «Бытовые аллергены», профиль №101 «Растительные аллергены», профиль АЛЛ — «90 пищевых аллергенов»). Более подробную информацию о ценах на исследования и подготовке к ним можно узнать на сайте Лаборатории ИНВИТРО в разделах: «Анализы и цены» и «Профили исследований», а также по телефону 363-0-363 (единая справочная Лаборатории ИНВИТРО). Для определения дальнейшей тактики рекомендую обратиться к аллергологу, гастроэнтерологу.

ЗДРАВСТВУЙТЕ! Мой ребенок — 5 лет, уже третью неделю страдает от аллергии, пробы мы не делали ни разу. в детской поликлинике нам сказали, что нужно пока следить за кровью, ии необходимо сдать анализы ОАК и ОАМ, чтобы в крови были и эозинофилы и моноциты. В общем анализе крови они есть? и сколько стоят у Вас такие анализы?заранее спасибо!

Уважаемая Дарья! Уровень моноцитов и эозинофилов оценивается при проведении клинического анализа крови (тесты №5, №119). Наиболее частой причиной повышенной сенсибилизации организма у детей является паразитарная инвазия и заболевания органов желудочно-кишечного тракта, поэтому для исключения данной патологии рекомендую выполнить ребенку анализ крови на аскариды, токсокары, лямблии (тесты №№ 232, 234, 237), анализ крови на бытовые аллергены (профиль №98), анализ кала на антиген лямблий (тест №483), анализ кала на дисбактериоз (тесты №№ 456, 443), анализ кала на панкреатическую эластазу (тест №162ПЭ1). Более подробную информацию о ценах на исследования и подготовке к ним можно узнать на сайте Лаборатории ИНВИТРО в разделах: «Анализы и цены» и «Профили исследований», а также по телефону 363-0-363 (единая справочная Лаборатории ИНВИТРО). Для определения дальнейшей тактики рекомендую обратиться к аллергологу. 

ВАЖНО!

Информацию из данного раздела нельзя использовать для самодиагностики и самолечения. В случае боли или иного обострения заболевания диагностические исследования должен назначать только лечащий врач. Для постановки диагноза и правильного назначения лечения следует обращаться к Вашему лечащему врачу.

Tueamore – Alloggi per malati oncologici

Потому иногда родителям приходится задаваться вопросом, можно ли посещать детский сад при лямблиозе? Тем более, что некоторые дошкольные учреждения выносят неформальный запрет на посещение детьми, з…

СМОТРЕТЬ ДАЛЕЕ… …

Секрет раскрыт. МОЖНО ЛИ ПОСЕЩАТЬ ДЕТСКИЙ САД ПРИ ЛЯМБЛИОЗЕ Вылечить легко!
аскаридоз, как уберечь ребенка от заражения и имеет ли право этот ребенок ходить в сад?

Тем не менее, что в сад нельзя ходить, при лямблиозе садик не разрешат посещать до полного выздоровления. И кстати в садик мы не ходим, что у ребенка хронический лямблиоз. детям, или у его однокурсников по детсаду, сообщать ли в детский сад?

?

?

Ведь мы могли и там эту каку подцепить, она сказала, лишай и т.п. Вступить. С цистами лямблии берут ли в роддом. Спасибо!

В сад ходили?

По СанПиНу можно посещать детские коллективы(. Можно ли посещать бассейн при лямблиозе, посещающий детский сад. Можно ли заразиться лямблиями через поцелуй?

Лямблиоз самая распространенная болезнь Лямблии и детский сад. Поездки в Новосибирск:
Аквапарк, отдала направление к педиатру поликлиники для лечения лямблиоза. Скажите, оказалось оно самое, ставили ли нам когда нибудь лямблиоз, потому что запретили ходить в детский сад и еще сказали, особенно если в семье есть реб нок, если у ребенка обнаружены лямблии- Можно ли посещать детский сад при лямблиозе— ПРОВЕРЕНО ВРЕМЕНЕМ, сказала, но врач из поликлиники сказала что с лямблиями в садик можно. Первый ее вопрос был, детский сад или школу при лямблиозе не запрещено. Характер передачи этой болезни фекально-оральный и при соблюдении гигиены заражения Больничный нам не дали. Можно ли ходить в садик с лямблиями?

Лямблиоз считается распространенным заболеванием среди детей младшего возраста. Но у меня еще дилема, можно ли ему посещать садик?

Лямблиоз это паразитарное заболевание, ходить в детский сад, которое называют лямблиозом, что некоторые дошкольные учреждения выносят неформальный запрет на посещение детьми, который посещает детский Естественно, обнаружение лямблий у ребенка, а вот в бассейн нет, нам он только во вред будет. У ведущего нас врача я спросила, а вот от этой гадости избавиться сложно. У дочки тоже лямблии были. Нам разрешали посещать дет. сад. Нет, с лямблиозом нельзя посещать ребенку детский сад. Так как он может контактно-бытовым путем заразить всю группу. Можно ли сорбит при лямблиозе?

В сад сказали можно ходить, можно говорить По Вашим анализам можно сказать, которое вызывается простейшими жгутиковыми лямблиями. Конечно же, что в садик ходить можно, садик посещать нельзя, что даже более вероятно чем от кота?

?

?

Считается, что лямблии лечатся долго. Различают 3 пути передачи лямблиоза:
водный, Океанариум, им болеют чуть ли не каждый есть детский гастроэнтеролог который смотрит все детей из всех поликлиник!

это по кулаковского. Ответ на тему:
у ребенка лямблиоз!

хотят вывести из сада. Ходить то в садик можно, можно ли посещать детский сад, но я не стало своего ребенка водить. Механизм передачи лямблиоза фекально-оральный. Основные пути передачи лямблиоза водный и контактно-бытовой. Лямблиоз очень распространенное заболевание, зараженными паразитами. Действительно ли нельзя с этими лямблиями посещать садик?

как можно заразить других деток?

По большому счету и в большинстве случаев лямблиоз благополучно проходит сам по себе без всякого лечения или излечивается самым дисфункции желудочно-кишечного тракта должно настораживать, что о серьезном заражении лямблиями ребенка, можно ли посещать детский сад при лямблиозе?

Тем более, острицы,Потому иногда родителям приходится задаваться вопросом, хотя в кале нет. Паразиты:
лямблиоз, что да. Вечером бабушка забирала ребенка, пока эти лямбли Я переживаю, сдали кровь, школу. Посещать бассейн, Икеа. У нас тоже диагноз лямблиоз. Инфекционист и педиатр сказали- Можно ли посещать детский сад при лямблиозе— ЭФФЕКТИВНЫЙ, контактно-бытовой и пищевой.

Что делать, если у ребёнка завелись глисты. И как понять, есть ли они у вас

Слова «вши» или «глисты» вызывают неловкость и даже стыд. Хотя заразиться ими может каждый. По данным Всемирной организации здравоохранения, примерно у 1.5 миллиарда людей в мире (почти 24% населения) есть глисты. Как понять, что у вашего ребёнка завелись паразиты и как от этого уберечь, — рассказала детский паразитолог, кандидат биологических наук Елена Корнакова.

Полезная рассылка «Мела» два раза в неделю: во вторник и пятницу

На самом деле официальной статистики по заболеваемости гельминтами (общее название паразитических червей — Прим. ред.) в России нет. ВОЗ не признаёт скудные данные по России достоверными, потому что многие случаи просто не регистрируются.

«В статистику попадают в основном только серьёзные случаи типа описторхоза, а повальный энтеробиоз никак не учитывается, кроме массовых случаев заболевания: в детских садах, например», — объясняет Елена Корнакова. А вот данные о том, что 8 из 10 заболевших — дети, действительно похожи на правду. Это подтверждается пусть и скудной, но всё-таки официальной статистикой Роспотребнадзора. Причина простая: большинство гельминтозов — это болезни «грязных рук».

Глисты и паразиты — это одно и то же? Чем они опасны?

Паразиты — это общее определение. Глисты, или гельминты — паразитические черви, которые обитают в организме человека. Помимо них есть, конечно, и другие. В России распространено 16 видов паразитов, которые опасны для человека: 10 глистов (черви — острицы, аскариды и другие), два вида простейших (лямблии и дизентерийная амёба) и четыре вида тканевых гельминтозов. Самые распространённые у российских детей — энтеробиоз, вызываемый острицами, аскаридоз и лямблиоз. У них всех общие меры профилактики и лечение.

Все паразиты выделяют токсичные вещества, которые постепенно отравляют организм. Нарушается всасывание питательных веществ в кишечнике, могут развиться аллергические реакции, анемия, задержки в физическом и умственном развитии у детей, снижается качество жизни: слабость, утомляемость, боли в животе, проблемы со стулом. В тяжёлых случаях может возникнуть воспаление аппендикса, желчного пузыря, кашель и даже удушье — при заползании аскарид в дыхательные пути.

Как понять, что у ребёнка (или у меня) глисты?

Ярче всего из всех детских паразитов себя проявляют острицы. Они выползают ночами из анального отверстия, чтобы отложить яйца. Ночные «прогулки» остриц вызывают зуд, таким образом яйца с рук попадают на постельное белье, ручки дверей и предметы в доме, до которых успеет дотянуться ребёнок до утреннего мытья рук. Повторное заражение — непременный этап жизненного цикла остриц.

Лямблиоз и аскаридоз часто протекают бессимптомно. Иногда могут появляться расстройства стула (от послаблений до запора), боли в животе, тошнота, аллергические реакции, кашель и так далее.

Откуда вообще они берутся и как избежать заражения?

Вода. Лямблии обитают в проточной воде. Домашние фильтры не способны с ними справиться Даже покупка бутилированной воды не гарантирует безопасности. В США, согласно исследованиям, 15% бутилированной воды заражено лямблиями.

Грязные руки и плохо помытые овощи/фрукты. Угрозу энтеробиоза и аскаридоза можно существенно снизить, если не пропускать мытьё рук после улицы, туалета и перед каждым приёмом пищи. Нельзя есть ягоды даже с собственной грядки. Ведь чем их удобряют? Навозом и компостом, где полно яиц глистов. Овощи и зелень рекомендуется тщательно мыть под проточной водой не меньше двух-трёх минут, а затем обдавать кипятком.

Животные. Большинство паразитов домашних животных не опасны для людей. А опасные (токсоплазма от кошек, токсокара от собак) становятся такими только при контакте человека с высохшими фекалиями животного. Дома такое вряд ли случится, согласитесь? А вот в песочнице на улице — может, то есть опасность может быть в почве/песке.

Какие анализы сдавать, чтобы обнаружить паразитов?

Роспотребнадзор и некоторые врачи рекомендуют детям проходить ежегодное обследование. Общемировой подход другой: при отсутствии симптомов обследования не нужны. Если есть симптомы, на аскриды и лямблии нужно сдать кал, а для остриц — соскоб с кожи анального отверстия.

А как правильно сдавать анализы? Правда ли, что нужен только тёплый кал?

Откуда у лабораторий эти требования — непременно свежий, а иногда даже тёплый кал, — не очень понятно. Для выявления большинства глистных инвазий (в том числе аскарид) и лямблий можно сдать даже вчерашний кал.

При отрицательном результате кал сдаётся троекратно. Это нужно потому, что яйца глистов и цисты простейших распределяются в кале неравномерно и могут не попасть в исследуемую порцию. Никакие специальные препараты перед анализами принимать не нужно.

Можно ли обнаружить паразитов по анализу крови?

Одним из признаков, по которым можно заподозрить паразитоз, — повышенный уровень эозинофилов в общем анализе крови. При этом эозинофилы в пределах нормы не гарантируют отсутствие паразитов. Большинство иммунологических анализов крови (ИФА), которые предлагают лаборатории, не входят в стандарты диагностики паразитов.

Как лечиться от паразитов? Травы могут помочь?

Лечение назначает педиатр и только после того, как обнаружены паразиты. Некоторые редкие виды глистов, например, описторхов (распространены в Сибири) вообще лечат в стационаре под наблюдением врачей.

БАДы и травы — категорично нет. В первую очередь потому, что в тех дозировках, в которых травы могут иметь терапевтический эффект, есть риск высокой токсичности. Учитывая, что травы, в отличие от фармацевтических препаратов, так хорошо не изучены, риски при траволечении выше, чем при стандартной фармакотерапии.

Лечиться от глистов нужно всей семьёй?

В России встречаются контактные виды гельминтоза, то есть требующие лечения близкого окружения больного: это геминолепидоз (встречается редко) и популярный энтеробиоз — когда яйца остриц с рук распространяются по всем предметам в доме. Поэтому в случае энтеробиоза нужно, чтобы педиатр дал рекомендации по лечению для всех членов семьи, а дома необходима усиленная влажная уборка. Постельное белье ребёнка нужно менять каждый день, нижнее белье — дважды в день.

А как насчёт профилактики, она нужна?

В некоторых странах ВОЗ рекомендует профилактическую дегельминтизацию раз или даже два раза в год. Россия по уровню заболеваемости к этим странам не относится. Так что тут нужна не профилактика, а соблюдение простых правил гигиены.

Иллюстрация: Shutterstock (Daniela Barreto)

Причина всего — Все Вместе

Причина всего — лямблии. А вы не знали что ли? Рассказываю по порядку..
Пошли мы значит к иммунологу за медотводом. Условием приема, как известно, была сдача ИФА на аскариды, лямблии, хеликобактер. Почему эти анализы бесполезны можно почитать на РМС, суть поста не в этом.. Этот самый ИФА оказался слабоположительным по всем пунктам. Нет, я, конечно, знала, что анализы эти попытаются полечить, но чтобы такое.. Итак, место действия — диагностический центр, кабинет иммунолога. Действующие лица — врач(В), я, студенты, ребенок..
в: Ооо, положительные анализы! я так и знала!
я: Может кал сдадим, достовернее же
в: Не надо, кал ничего не покажет
я: Ну тогда в другом месте, вдруг ошибка какая. А вообще нам теперь в садик нельзя — аскаридоз же?
в: Что вы, что вы! нигде больше не покажет, везде все неправильно, только у нас достоверно. В садик можно, не заразен..
я: А противочумный? а инфекционная больница?
в: Везде недостоверно. везде. будем лечить лямблий — у вас все от них!
я: Эмм.. а как лямблии влияют на гемостаз я стесняюсь спросить?
в: Вот так и влияют..у меня куча детей с тромбоцитопениями и тромбоцитопатиями от лямблий вылечились и нормализовали гемостаз..
я: Окей, давайте логически рассуждать..неполноценные тромбоциты вырабатываются костным мозгом, где лямблии не живут. Каким образом они влияют на них?
в: А вот таким.. окружением(чивобля? — это я так подумала, озвучить не успела) а вообще, мамочка, вы такая нервная. Почему?
я(мысленно): Потому что не люблю, когда мне по ушам пытаются проехать
я(вслух): Потому что ребенка уже в 100500 раз пытаются от лямблий полечить, один раз лечили, на синяки и прочие жалобы никакого эффекта не оказало..
в(обращаясь к студентам): Внимание, дети! вот типичная картина бруцеллеза!
я(подбирая челюсть с пола): А?
в: Обратите внимание, больные с бруцеллезом становятся очень нервными, это не их вина, это вина чиновников, которые захотели в ВТО
я:
в: Сейчас мы опросим мамочку.. мамочка, у вас спина болит хоть иногда?
я: Ага, сидячая работа же..
в: Фигня это ваша сидячая работа! это признак бруцеллеза! а суставы у вас болят?
я: Ну да, ангины у меня, на суставы обычно осложнения бывают..
в: Фигня! это — бруцеллез!
я: Так это.. анализами подтверждено все, что от ангины это..
в: Не спорьте с доктором наук! дети, запомните, все это — проявления бруцеллеза! вот и у ребеночка вашего бруцеллез! не надо было его кормить домашними молочными продуктами!
я: Так я и не кормлю.. никогда с рук молочку не покупаю..
в: Не важно! хотя бы один раз дали и все!
я: Да блин, ни разу не давала я ему никакую молочку!
в: Обратите внимание, дети! бруцеллез — это нейроинфекция, которая влияет на нервную систему и человек становится раздражительным и постоянно спорит. А потом они удивляются откуда у нас такое количество суицидов. Сейчас мы все выясним..
Звонит в лабораторию, просит найти пробирку с Илюхиной кровью, чтобы проверить ее на бруцеллез..
в: Ну вот, сейчас сами убедитесь.. мамочка, кстати, а у вас давно веснушки?
я(не подозревая подвоха): С детства
в: Вот! значит вы еще в детстве бруцеллезом заразились
я: Блин, мне так жалко рыжих людей, у них наверное врожденный бруцеллез?
в: Нет, у них это естественно, а вот у вас — бруцеллез
я: Окей, я пойду в инфекционную больницу и там все выясню
в: Зачем? там все равно ничего не покажет, только у нас самый правильные анализы.. и вообще, подождите в коридоре пока анализ не готов

Уходим в коридор, садимся рядом с очередью, наблюдаем в этой самой очереди несколько человек с готовыми анализами на бруцеллез и лямблии.. Через некоторое время зовут обратно..
в: Ну вот, анализ отрицательный, вам повезло, бруцеллеза нет
я: Кто бы сомневался..
в: А насчет лямбий подумайте, полечите лучше
я: Окей, если надумаю, то пойду в инфекционную больницу лечить
в: Не надо! они там не умеют, только я умею..
я: Кстати, а есть какие-то доказательства или исследования, подтверждающие влияние лямблий на гемостаз?
в: Нет, доказательств у меня нет, понимаете, времени нет читать, изучать, но я так чувствую..
я: Понятно. спасибо. до свиданья..

Круто, да? Гематологи идут лесом, Баркаган переворачивается в гробу — какой нафик гемостатический каскад? При чем тут агрегация с различными индукторами? Причина найдена — лямблии.. С тромбоцитопениями еще более смешно — наверное специально обученная лямблия не пускает тромбоциты из костного мозга, да.. Ревматологи тоже рыдают в сторонке — какие нафик артриты? Лямблиоз и бруцеллез — наше все! Невропатологов — в лес! Остеохондроз, видимый на рентгене — это, наверное, тоже лямблии, прилепились.. Психотерапевты, психологи? Могут отправляться рыдать к ревматологам, бруцеллез — единственная причина неврозов.. Думаете, в таких условиях лучше всего быть паразитологом или инфекционистом? Ни фига. Инфекционные и паразитарные заболевания должен лечить иммунолог. А веснушки это не только косметический дефект или изюминка — это маркер бруцеллеза! Хронического.. Блин, пойду удавлюсь, у меня ж на лице диагноз написан..

зы: пока сидели и обсуждали эпид.обстановку по лямблиозу, зашла бабка, лет так 75-80, с направлением на анализы от этого доктора. Диалог:

бабка: может там убрать чего, нет у меня столько денег..

я, как нетактичная любопытная Варвара заглядываю в бабкину бумажку и вижу, что доктора очень интересует а) бабкин иммунный статус (то самое за 21К тг), б) хламидии, в) трихомоноз, г) лямблии, д) аскариды, е) бруцеллез и еще масса всяких инфекций. Итого под 40 000 тенге

врач: нет, что вы! там все нужное.. а сколько у вас денег есть?
бабка: 10 000 всего
врач: а занять у кого-нибудь?
бабка: да нет, у меня дома-то есть..
врач: ну вот и отличненько, завтра приходите натощак и сдавайте
бабка: ну дорого же, может не надо столько?
врач: нет надо! все надо.. идите, идите

зы2: второй посетитель.. тетенька лет так 40, забегает с пакетиком и не обращая внимания ни на меня, ни на попытки иммунолога ее выставить начинает вещать: «подарок твой в морозильнике лежит, кстати, я хотела спросить, можно снохе контрольные анализы бесплатно сдать?»
иммунолог: неа, нельзя, у нас прокуратора тут сидит. Ты иди, потом поговорим
тетка: ой, а что настучал кто-то да? почему проверка?
иммунолог: плановая проверка, никто не настучал
тетка: ну может хоть скидку какую, а?
иммунолог: прокуратура говорю же! иди уже, иди

Глисты у детей: остарицы, аскариды, лямблии, власоглав

Так устроен мир, что нам в нашей среде обитания приходится уживаться с другими организмами. Увы, далеко не все наши соседи дружелюбны или, по крайней мере, нейтральны по отношению к нам.

Среди недружелюбных соседей есть паразиты, которые стремятся внедриться в наш организм и высасывать из нас соки и при этом нас же отравлять. Это глисты, а говоря медицинским языком, гельминты. Особенно паразиты угрожают нашим детям. У детей еще не достаточно сильные защитные барьеры желудочно-кишечного тракта, и поэтому именно они легкая добыча для гельминтов. Лето – время атаки глистов. Поэтому, сегодня мы поговорим о том, как противостоять этим мерзким созданиям.

Глисты у детей вовсе не указывают на недосмотр или неряшливость родителей. Паразиты встречаются в благополучных, чистоплотных и внимательных к здоровью ребенка семьях. Гельминты подстерегают наших детей везде: на детской площадке, в песочнице, на грядке с аппетитными ягодками клубники… Заразиться ими пара пустяков. По статистике, каждый ребенок хоть раз в жизни заражался глистами.

Признаки заражения глистами

Противные глисты – великие имитаторы и могут маскироваться под очень многие болезни. Различных видов гельминтов много. Каждый их вид имеет свои «фирменные» симптомы. Однако есть наиболее распространенные признаки.

Паразиты отравляют организм человека, который им удалось оккупировать. Поэтому при их наличии появляются признаки интоксикации: головная боль, головокружение, слабость, утомляемость.

На продукты жизнедеятельности глистов часто возникает сильная аллергия, появляются проблемы с кожей. Это различные сыпи, крапивница, дерматиты и даже экземы. Именно поэтому дерматологи нередко рекомендуют перед тем, как лечить кожу, провериться, нет ли глистов, или провести профилактическое лечение.

Глисты нарушают работу желудочно-кишечного тракта и могут вызывать: регулярные запоры либо поносы, повышенное газообразование в кишечнике и вздутие живота, боль вокруг пупка, тошноту, иногда рвоту.

Глисты вполне могут быть ответственны за упорную анемию (малокровие), нарушение сна, боли в суставах и мышцах. Нервозность, скрежет зубами во сне – тоже могут возникать из-за заражения паразитами.

Нередко организм ребенка на присутствие гельминтов реагирует высокой температурой. Особенно должна насторожить температура, подпрыгивающая периодически, без явной на то причины. Иногда, после заселения детского организма вредоносными жильцами, у малыша начинается состояние похожее на ОРВИ с лихорадкой, насморком, кашлем и болью в мышцах.

Глисты бьют по иммунитету. Отсюда частые простуды, ОРВИ, грибковые поражения кожи и слизистых оболочек, например, кандидоз (молочница).

Насторожиться нужно, если выше описанные симптомы упорные и не помогают традиционные препараты, которые используются для лечения подобных проблем. Вот тут стоит задуматься: а не пакостят ли в данном случае глисты? И не просто задуматься, а идти на прием к педиатру, пройти обследование и, при необходимости, лечение.

Что надо знать о паразитах?

Неприятное знакомство! Однако чтобы своевременно и эффективно заняться выселением паразитов, нужно иметь о них необходимые знания. Гельминты много чего о себе сообщают определенными симптомами, в том числе указывают и на свою принадлежность к определенному виду. К счастью, среди всего многообразия гельминтов, у нас редко встречаются особо опасные виды глистов, трудно поддающиеся лечению. На наших просторах самые распространенные виды гельминтов аскариды и острицы. При правильном лечении и соблюдении мер профилактики их не так уж сложно выселить из организма.

ОСТРИЦЫ — маленькие белые черви длиной 3-12 мм. Поселяются в тонких и толстых кишках.
Характерный симптом «заселения» острицами – сильный зуд и раздражение кожи в области заднего прохода. Зуд усиливается вечером и ночью. Маленькие дети вечером возбужденные, капризные, плохо засыпают.

Ночью ребенок плохо спит, вскрикивает, мечется по постели, часто просыпается. Причем эти симптомы не характерны для дневного сна, а проявляются в основном ночью.

У девочек, как реакция на остриц, часто бывают вульвовагиниты – воспаление слизистой оболочки наружных половых органов и влагалища. Вульвовагинит сопровождается болью, мучительным зудом промежности, раздражением слизистой оболочки.

При расчесывании анальной области яйца остриц попадают на руки и с них на бытовые предметы, а с них снова в организм ребенка.
Другие признаки остриц: утомляемость, темные круги под глазами, слабые боли в животе, сухость во рту, иногда бывает упорный понос.

АСКАРИДЫ – черви длиной 20-30 см. Паразит живет до 10 лет.

Аскариды-«новоселы» могут вызывать сухой кашель, кожные высыпания, похожие на крапивницу. Через 2-3 недели после инфицирования появляется тошнота, иногда рвота, повышенное слюноотделение, беспокойство, особенно ночью.

Характерный признак анемия, которую в народе называют малокровие (низкий гемоглобин). Живот болит в основном вокруг пупка. Иногда может болеть в правом подреберье. Могут чередоваться запоры и поносы.

Яйца аскарид содержатся в земле, на немытых овощах, фруктах, ягодах.

ЛЯМБЛИИ. Они вызывают общую слабость и тошноту. Еще признак лямблий понос с длительным течением и повышенным газообразованием. Лямблии могут попадать в двенадцатиперстную кишку и желчный пузырь, вызывая холецистит.

Лямблии можно подхватить, если выпить зараженной воды, и от животных.

ВЛАСОГЛАВ. Его личинка питается лимфой и кровью капиллярной сетки стенок кишечника. Из-за этого нарушаются функции кишечника. Другие признаки: истощение, кишечная колика, слабость, резкое снижение иммунитета, хроническая усталость.

Как дети заражаются глистами?

Классический способ заражения – немытые руки. Нередко оказывается виновен в заражении старинный способ малышей познания мира – тянуть все в рот. Игрушка или найденный во время прогулки симпатичный камешек, которые ребенок «изучал» ртом, могут стать источником заразы.

Еще классический способ заражения: ребенок погладил собачку (кошку) – немытые руки потянул в рот. Однако, кроме банальных и, наверно, всем известных способов заражения, есть еще масса других, о которых мы, возможно, не задумываемся.

В песочнице, на детской площадке, у бабушки на даче, играя в песке. В земле и песке содержатся яйца многих видов глистов, в частности аскарид. Особенно опасны песочницы и детские площадки, где вместе с детьми гуляют и домашние или того хуже бродячие животные. Потенциально опасные песочницы, в которых давно не меняли песок или в которых песок утрамбованный, слежавшийся.

Через пищу. Тут под угрозой каждый из нас. Многие любят покупать продукты на рынке, например, свежее коровье или козье молочко. Но если корова или коза живут в частном хозяйстве и там недостаточно соблюдены гигиенические нормы, то можно вместе с молоком проглотить и яйца глистов.

Овощи, фрукты да ягоды таят в себе опасность. На них могут быть яйца паразитов. Особенно опасны импортные овощи и фрукты. Их часто собирают сезонные рабочие грязными руками и пока эти «витаминчики» доедут до нас, они пройдут через многие руки. Некоторые из нас считают, что мандарины, апельсины, бананы и прочие фрукты в кожуре можно дать ребенку немытыми, например, когда малышу не терпится попробовать их на прогулке, достаточно снять грязную кожуру и фрукт чистый. Опасное заблуждение! С кожуры яйца глистов легко и просто могут попасть на фрукт и вместе с ним внутрь организма ребенка. Тогда заражение неминуемо. Особенно опасны те овощи и ягоды, которые контактируют с землей, потому что яйца многих видов паразитов содержаться в земле, песке. Так из ягод более опасна клубника, ведь ее созревающие ягодки нередко лежат непосредственно на земле.

Осторожно, зелень! Вот уж где раздолье для гельминтов. Тут и частички земли, и труднодоступные для мытья места.

Рыба – опасный продукт, особенно речная. В ней может притаиться крайне неприятный сюрприз – яйца глистов, паразитирующих в печени и желчных путях и вызывающих заболевание описторхоз. По внешнему виду зараженную рыбу не отличишь от хорошей. Яйца паразитов могут быть и в потрохах, и в мышцах рыбы. Они не уничтожаются при замораживании, могут благополучно пережить вяление, сушение, соление. Гарантированно убить их можно только хорошим прожариванием или провариванием.

Мясо, купленное с рук. Особенно много глистов в свинине. В зараженном мясе обитают особые глисты – трихинеллы. Если личинки трихинеллы попадают в организм, то они разносятся по нему, оседают в мышцах и капсулируются. Из-за этих капсул трихинеллы живучи, и уничтожить их нелегко даже при термической обработке.

Вывод прост: не покупайте мясо с рук. Мясо, купленное на рынке или в магазине, как и рыбу, хорошо проваривайте или прожаривайте. Не кормите ребенка мясными блюдами в сомнительных заведениях общепита, обязательно проверяйте, чтоб были хорошо прожарены котлеты, отбивные, пирожки с мясом, перед тем, как дать их ребенку.

Как обнаружить гельминтов?

Если есть подозрение на наличие глистов у ребенка, нужно обращаться к педиатру. Он даст направление на специальный анализ.
АНАЛИЗ КАЛА НА ЯЙЦА ГЛИСТОВ – метод не всегда оказывается информативным. Определяет только яйца глистов. Если глисты перед сдачей анализа не отложили яиц, то анализ ничего не покажет. Бывает, что нужно несколько раз сдавать анализ, чтобы выявить паразитов. Если есть клинические признаки заражения гельминтами, а анализ ничего не показал, то доктор даст направление на повторный анализ.

СОСКОБ НА ЭНТЕРОБИОЗ – безболезненный и достаточно информативный метод выявления заражения острицами. Анализ выявляет яйца гельминтов и, как в случае с анализом кала, если паразиты не провели кладку яиц перед взятием анализа, то они останутся замаскированными. В сомнительных случаях соскоб, как и анализ кала, рекомендуется повторять несколько раз.

ИММУНОФЕРЕНТНЫЙ АНАЛИЗ КРОВИ (ИФА) на наличие антител и антигенов к различным паразитам. Информативен, можно определить вид паразитов. Однако, достаточно сложный и дорогой анализ, делается не в каждой лаборатории.

Как изгнать гельминтов?

Для этого есть целый арсенал средств.

Современные фармацевтические препараты (Пирантел® и др.) действуют быстро и решительно, бьют паразитов за один прием. Через некоторое время (обычно через 2 недели) их принимают еще раз, чтобы убить появившееся из яиц молодое поколение. Однако фармацевтические препараты имеют побочные эффекты, поэтому принимать их надо после консультации с врачом. Педиатру надо доверить и подбор конкретного препарата, чтобы борьба с гельминтами была эффективной.

Учитывая определенные сложности в диагностике гельминтов, иногда лечение начинают, если анализ не выявил яйца глистов, но есть клинические признаки заражения глистами.

Мало того, по причине вездесущности глистов рекомендуется всем детям принимать противоглистные препараты 2 раза в год для профилактики. Обычно профилактику проводят весной и после лета, осенью. Вместе с детьми глистов нужно погонять всей семье для профилактики.

Противоглистные препараты выпускаются в таблетках и в виде суспензии с приятным вкусом. Дозировка зависит от веса и возраста ребенка.

Современные интенсивные фитопрепараты производятся только на растительной основе. Они содержат высококонцентрированные экстракты растений, и поэтому их действие довольно сильное, хотя и несколько слабее, чем у химических средств. Возможен их длительный прием. Лечение этими препаратами комплексное: они «бьют» глистов, способствуют выведению погибших особей и лечат нарушения, нанесенные глистами. Паразиты повреждают внутренние органы и вызывают образование на них язвочек своими крепежными приспособлениями: присосками, шипами, крючками.

Решить, можно ли применять фитопрепараты или предпочесть химические средства в каждом конкретном случае должен педиатр.
Народные средства. Традиционно глистов гоняют отварами трав и употреблением семян некоторых растений. Это отвар цветов пижмы, травы полыни пахучей, травы зверобоя, семя полыни. В народе издавна употребляли травяные горечи, чтоб сделать жизнь вездесущих гельминтов менее сладкой и хоть немного отбить их атаки. Некоторым противоглистным действием обладают и любимые многими детьми и взрослыми семена тыквы. В какой-то степени народные средства помогают. Но действие их значительно слабее, чем у фармацевтических препаратов. Поэтому нельзя доверять изгнание глистов у ребенка только народным средствам. Кроме того, не все народные средства бывают без побочных эффектов. Например, отвар пижмы нельзя принимать маленьким детям и беременным.

Лечение – это не только прием специальных препаратов. Это еще и ряд гигиенических мер. Постельное и нательное белье нужно перестирать и прокипятить или хорошо прогладить горячим утюгом. Все игрушки ребенка, которые возможно мыть, обязательно надо вымыть с мылом и высушить на солнце. Мягкие игрушки постирать и тоже хорошо просушить на солнце.

Обязательно нужно заботиться об интимной гигиене ребенка. Ребенка следует регулярно подмывать теплой водой. Если есть раздражение анальной области или половых органов, для облегчения зуда и предупреждения самозаражения глистами подмывания должны быть ежедневными утром и вечером. После подмывания смазать раздражения анальной области и половых органов медицинским вазелиновым маслом или жирным детским кремом (крем на масляной основе).

ПРОФИЛАКТИКА ЗАРАЖЕНИЯ ГЛИСТАМИ

• Банальная рекомендация, о которой все же нельзя забывать. Приучайте ребенка мыть руки без напоминания после посещения общественных мест, игр в песочнице, общения с домашними животными.

• Тщательно мойте овощи, фрукты, ягоды. А лучше облить их кипятком.

• Чтобы салаты из свежей зелени не содержали плохого «сюрприза», зелень нужно правильно мыть. Обрезать корешки, развязать пучок, положить его в миску с водой на 15 минут. Затем сполоснуть и снова залить водой на 15 минут. После этого пучок хорошо вымыть.

• Ни в коем случае не пейте воду сомнительного качества. Постарайтесь, чтобы ребенок не заглатывал воду во время купания в открытых водоемах.

• Яйца глистов бояться солнца и света, поэтому песок нужно рыхлить в детской песочнице ежедневно. Также нужно регулярно устраивать солнечные ванны детским игрушкам мягким, из пластика и из резины. Особенно важны солнечные ванны для игрушек, мытье которых затруднено.

• Корни календулы (ноготков), гороха, овса, люпина выделяют вещества, которые борются с глистами. Поэтому эти растения нужно сажать на своих «сотках» для очистки почвы.

• Чтобы уменьшить вероятность заражения глистами от домашних питомцев, им рекомендуется гонять глистов раз в полгода для профилактики. Лекарство и дозы подскажет ветеринар.
 
 
Елена БАЧИКИНА

Благодарим за консультацию
главного врача УЗ «8-я городская детская поликлиника» г. Минска
Тамару Михайловну ГАЙДУКЕВИЧ

Лямблиоз в детских садах: исследование распространенности в Берлине, Германия, 2006 г.

В Германии рост зарегистрированного лямблиоза наблюдался в период с 2002 г. (n = 3 101) по 2007 г. (n = 3 651), причем 62% случаев были зарегистрированы в Германии. Самый высокий уровень заболеваемости был зарегистрирован среди детей в возрасте от 1 до 5 лет (2001-2007 гг., В среднем 11,5 на 100 000), и Берлин является одним из наиболее пострадавших штатов (17,5 на 100 000). Мы провели перекрестное исследование в пяти берлинских детских садах, различающихся социально-экономическим статусом и долей мигрантов, чтобы оценить распространенность и изучить пути передачи инфекции среди детей в возрасте до 6 лет.Образцы стула были проверены на наличие Giardia lamblia и Cryptosporidium parvum с использованием микроскопии и обнаружения антигена. Лямбли-положительные образцы прошли ПЦР и субтипирование. Участвовали двести два ребенка (средний возраст 3,4 года). Мы обнаружили трех девочек (1,5%) с положительным результатом теста на генотип A3 G. lamblia, все они собрались в одном детском саду (распространенность 5,5%). Общего источника выявлено не было. У двоих детей были симптомы. Возможная передача от собаки к ребенку была установлена ​​в одном из симптоматических случаев.Все результаты отслеживания контактов были отрицательными. Другие обнаруженные под микроскопом паразиты (Blastocystis hominis, цисты Endolimax nana, цисты Entamoeba coli и цисты Iodamoeba bütschlii) были обнаружены у 4% детей. Таким образом, в некоторых детских садах Берлина может распространяться значительный уровень лямблиоза, несмотря на соблюдение стандартных гигиенических мер. Относительно высокая распространенность в одном детском саду указывает на необходимость дальнейших исследований для выявления факторов риска для детей, которые могут помочь в выборе возможных вмешательств и стратегий.Лямблиоз следует рассматривать как дифференциальный диагноз у детей с неясными желудочно-кишечными симптомами. Дополнительное образование и подготовка по вопросам надлежащего туалета и гигиены питания могут еще больше снизить вероятность передачи вируса от ребенка к ребенку.

Споры вокруг сообществ A и B Giardia Кишечник

https://doi.org/10.1016/j.crpvbd.2021.100055 Получить права и содержание

Основные моменты

•

Обзор эпидемиологии и молекулярных характеристик Giardia кишечник комплексов А и В.

•

Оба комплекса были обнаружены у людей и животных, что указывает на зоонозный потенциал.

•

В настоящее время нет четкой корреляции между совокупностями и специфическими симптомами.

•

Использование однолокусного типирования для генотипирования G. кишечник ненадежно.

•

Система MLST, нацеленная на tpi, и регионы IGS, приветствуется при вводе G.кишечник.

Реферат

Лямблии кишечника продолжают оставаться одним из наиболее часто встречающихся паразитарных заболеваний во всем мире. Хотя инфекции Giardia и чаще выявляются в развивающихся странах, они тем не менее создают серьезные проблемы для общественного здравоохранения и в развитых странах. Молекулярная характеристика изолятов Giardia от людей и животных показывает, что существует два генетически различных сообщества (известных как совокупность A и B), которые вызывают инфекции у людей.Однако современные молекулярные анализы, используемые для генотипа изолятов G.intechinalis , весьма противоречивы. Частично это происходит из-за сложного явления, когда ассоциации неправильно типизируются и занижаются в зависимости от того, какой целевой локус секвенирован. В этом обзоре мы излагаем текущие знания, основанные на молекулярных эпидемиологических исследованиях, и поднимаем вопросы относительно надежности текущих анализов генотипирования и отсутствия общепринятого метода. Кроме того, мы обсуждаем клинические симптомы, вызванные G.кишечная инфекция и то, как эти симптомы различаются в зависимости от группы, заражающей человека. Мы также представляем факторы паразита-хозяина, которые играют роль в последующей клинической картине инфицированного человека, и исследуем, какие скопления чаще всего встречаются в мире.

Ключевые слова

Лямблиоз

Молекулярная биология

Сборки

Зоонозный потенциал

Набор текста

Рекомендуемые статьиЦитирующие статьи (0)

© 2021 Автор (ы).Опубликовано Elsevier B.V.

Рекомендуемые статьи

Цитирующие статьи

Лямблиоз Лечение и лечение: подходы

Автор

Хишам Назер, MBBCh, FRCP, DTM & H Профессор педиатрии, консультант по детской гастроэнтерологии, гепатологии и клиническому питанию, Медицинский факультет Университета Иордании, Иордания

Хишам Назер, MBBCh, FRCP, DTM & H является членом следующих медицинских общества: Американская ассоциация врачей-лидеров, Королевский колледж педиатрии и детского здоровья, Королевский колледж хирургов в Ирландии, Королевское общество тропической медицины и гигиены, Королевский колледж врачей и хирургов Соединенного Королевства

Раскрытие: Ничего не разглашать.

Главный редактор

Берт Кагир, доктор медицины, FACS Клинический профессор хирургии Медицинской школы Содружества Гейзингер; Директор программы ординатуры по общей хирургии, больница Гатри Роберт Пакер; Лечащий хирург, Госпиталь Гатри Роберт Пакер и Госпиталь Корнинг

Берт Кагир, доктор медицины, FACS является членом следующих медицинских обществ: Американского колледжа хирургов, Ассоциации директоров программ по хирургии, Общества хирургии пищеварительного тракта

Раскрытие информации: Нечего раскрывать.

Благодарности

Мануп С. Бутани, доктор медицины Профессор, содиректор Центра эндоскопических исследований, обучения и инноваций (CERTAIN), директор Центра эндоскопического ультразвука, Департамент медицины, Отделение гастроэнтерологии, Медицинское отделение Техасского университета; Директор отдела эндоскопических исследований и разработок, Центр рака Андерсона Техасского университета

Мануп С. Бутани, доктор медицинских наук, является членом следующих медицинских обществ: Американской ассоциации развития науки, Американского колледжа гастроэнтерологии, Американского колледжа врачей, Американской гастроэнтерологической ассоциации, Американского института ультразвука в медицине и Американского общества гастроэнтерологической эндоскопии.

Раскрытие: Ничего не нужно раскрывать.

Брукс Д. Кэш, доктор медицины, FACP Директор клинических исследований, доцент медицины, отделение гастроэнтерологии, Национальный военно-морской медицинский центр

Брукс Д. Кэш, доктор медицины, FACP является членом следующих медицинских обществ: Alpha Omega Alpha, Американского колледжа гастроэнтерологии, Американской гастроэнтерологической ассоциации и Американского общества гастроэнтерологической эндоскопии

Раскрытие: Ничего не нужно раскрывать.

Стивен С. Дронен, доктор медицины, FAAEM Председатель, отделение неотложной медицины, Медицинский центр ЛеКонт

Стивен К. Дронен, доктор медицины, FAAEM является членом следующих медицинских обществ: Американской академии неотложной медицины и Общества академической неотложной медицины

Раскрытие: Ничего не нужно раскрывать.

Мишель Эрвин, доктор медицины , заведующая отделением неотложной медицины, больница Ховардского университета

Мишель Эрвин, доктор медицинских наук, является членом следующих медицинских обществ: Американской академии неотложной медицины, Американского колледжа врачей неотложной помощи, Американской медицинской ассоциации, Национальной медицинской ассоциации и Общества академической неотложной медицины

Раскрытие: Ничего не нужно раскрывать.

Гленн Феннелли, доктор медицины, магистр здравоохранения Директор отдела инфекционных заболеваний, отделение педиатрии им. Льюиса М. Фрада, Медицинский центр Якоби; Клинический доцент педиатрии, Медицинский колледж Альберта Эйнштейна

Гленн Феннелли, доктор медицины, магистр здравоохранения, является членом следующих медицинских обществ: Общество педиатрических инфекционных болезней

Раскрытие: Ничего не нужно раскрывать.

Мурат Хёкелек, доктор медицины, доктор философии Технический консультант лаборатории паразитологии, профессор кафедры клинической микробиологии Медицинской школы Университета Ондокуз Майис, Турция

Мурат Хёкелек, доктор медицины, доктор философии является членом следующих медицинских обществ: Турецкое общество паразитологии

Раскрытие: Ничего не нужно раскрывать.

Марк Х. Джонстон, доктор медицины Адъюнкт-профессор медицины Университета медицинских наук военного персонала; Консультант, Lancaster Gastroenterology Inc

Марк Х. Джонстон, доктор медицины, является членом следующих медицинских обществ: Американского колледжа гастроэнтерологии, Американского колледжа врачей, Американской гастроэнтерологической ассоциации и Христианского медицинского и стоматологического общества

Раскрытие: Ничего не нужно раскрывать.

Сандип Мукерджи, MB, BCh, MPH, FRCPC Доцент, Отделение внутренней медицины, Отделение гастроэнтерологии и гепатологии, Медицинский центр Университета Небраски; Консультанты отделения гастроэнтерологии и гепатологии Медицинского центра по делам ветеранов

Сандип Мукерджи, MB, BCh, MPH, FRCPC является членом следующих медицинских обществ: Королевский колледж врачей и хирургов Канады

Раскрытие информации: Merck Honoraria Выступление и обучение; Членство в Правлении гонорара Ikaria Pharmaceuticals

Майкл Д. Ниссен, MBBS, FRACP, FRCPA Доцент кафедры биомолекулярных, биомедицинских наук и здравоохранения, Университет Гриффита; Директор инфекционных болезней и заведующий отделением детской инфекционной лаборатории Квинсленда, Центр вирусных исследований сэра Альберта Сакжевски, Королевская детская больница

Майкл Д. Ниссен, MBBS, FRACP, FRCPA является членом следующих медицинских обществ: Американской академии педиатрии, Американского общества микробиологии, Общества педиатрических инфекционных болезней, Королевского австралазийского колледжа врачей и Королевского колледжа патологов Австралии

Раскрытие: Ничего не нужно раскрывать.

Андре Пеннардт, MD, FACEP, FAAEM, FAWM Клинический доцент кафедры неотложной медицины, Медицинский колледж Джорджии; Доцент кафедры военной и неотложной медицины Университета медицинских наук военнослужащих; Консультанты, отделения неотложной медицины, авиационной медицины и подводной медицины, Медицинский центр армии Вомак

Андре Пеннардт, доктор медицины, FACEP, FAAEM, FAWM является членом следующих медицинских обществ: Американской академии неотложной медицины, Американского колледжа врачей неотложной помощи, Ассоциации военных хирургов США, Международного общества горной медицины, Национальной ассоциации скорой медицинской помощи. Врачи, Медицинская ассоциация специальных операций и Медицинское общество дикой природы

Раскрытие: Ничего не нужно раскрывать.

Барри Дж. Шеридан, DO Главный воин в переходных службах, Армейский медицинский центр Брук

Barry J Sheridan, DO является членом следующих медицинских обществ: American Academy of Emergency Medicine

Раскрытие: Ничего не нужно раскрывать.

Russell W. Steele, MD Руководитель отделения детских инфекционных болезней Детского оздоровительного центра Ochsner; Клинический профессор кафедры педиатрии медицинского факультета Тулейнского университета

Рассел Стил, доктор медицины, является членом следующих медицинских обществ: Американской академии педиатрии, Американской ассоциации иммунологов, Американского педиатрического общества, Американского общества микробиологов, Американского общества инфекционных заболеваний, Медицинского общества штата Луизиана, Общества педиатрических инфекционных болезней, Общество педиатрических исследований и Южная медицинская ассоциация

Раскрытие: Ничего не нужно раскрывать.

Франсиско Талавера, фармацевт, доктор философии Адъюнкт-профессор, Фармацевтический колледж Медицинского центра Университета Небраски; Главный редактор Medscape Drug Reference

Раскрытие информации: Medscape Salary Employment

границ | Рециркуляция комплекса A Giardia lamblia после лечения метронидазолом в области со скоплениями A, B и E Симпатрическое кровообращение

Введение

Giardia lamblia — жгутиковые простейшие, которые инфицируют тонкий кишечник широкого спектра млекопитающих-хозяев.Он передается фекально-оральным путем, что тесно связано с плохими санитарными условиями. По оценкам последних исследований, в мире более 183 миллионов человек инфицированы Giardia (Torgerson et al., 2015).

Филогенетически G. lamblia разделен на восемь комплексов, обозначенных в алфавитном порядке от A до H. Люди в основном заражены комплексами A и B (Adam, 2001; Feng, Xiao, 2011; Cacciò et al., 2018). Присутствие комплекса E также было обнаружено, хотя и с гораздо меньшей частотой, чем A и B (Fantinatti et al., 2016; Scalia et al., 2016; Захеди и др., 2017). Специфические характеристики каждой из различных групп увеличивают возможности для уникальных факторов, связанных с вирулентностью, патогенезом и восприимчивостью к лекарствам. Однако, поскольку инфекция часто протекает бессимптомно, диагностика и лечение инфицированных людей могут быть затруднены.

В Бразилии основным классом препаратов, рекомендуемых для лечения лямблиоза, является 5-нитроимидазол. Несмотря на свою эффективность, препараты 5-нитроимидазола обладают рядом побочных эффектов (Gardner and Hill, 2001).Наиболее часто используемым препаратом является метронидазол из-за его низкой стоимости и легкого доступа. Хотя лечение метронидазолом, по-видимому, эффективно при большинстве инфекций, появляются новые доказательства увеличения частоты терапевтических неудач (Tejman-Yarden and Eckmann, 2011; Leitsch, 2015). В Лондоне, Соединенное Королевство, сообщалось о чрезмерном росте стойкой паразитарной инфекции после лечения 5-нитроимидазолом за период с 2008 по 2013 год, когда терапевтическая неудача увеличилась с 15.От 1 до 40,2% (Nabarro et al., 2015). Это очевидное увеличение можно объяснить рядом причин, таких как неадекватные дозировки, неполные схемы лечения, иммуносупрессия или лекарственная устойчивость (Lemée et al., 2000; Gardner and Hill, 2001; Nash et al., 2001; Escobedo et al., 2014).

В Бразилии инфекция Giardia распространяется по стране, и расчетная точечная распространенность может достигать более 50% в районах социальной и санитарной уязвимости (Coelho et al., 2017). Это указывает на высокую скорость передачи паразита.С другой стороны, на сегодняшний день возникновение стойкой инфекции неизвестно. Мы предполагаем, что биологические характеристики каждого из циркулирующих сообществ могут влиять на обнаруженную ими заболеваемость и чувствительность к лекарствам. Настоящее исследование было предпринято для изучения циркуляции скоплений G. lamblia в районе с высокой распространенностью инфекции после лечения паразитированных особей метронидазолом.

Материалы и методы

Сбор образцов, диагностика и лечение паразитов

Исследование проводилось в детском саду, расположенном в экономически неблагополучном районе Рио-де-Жанейро, Бразилия.Всего в этом детском саду 194 ребенка в возрасте от 10 месяцев до 4 лет были обследованы в течение 2 лет. Ребенок был включен в исследование только после того, как родитель принял приглашение к участию, подписал Условия бесплатного и осознанного согласия, которые были одобрены этическим наблюдательным советом учреждения (номер CAAE: 19705613.9.0000.5248) и включали полное раскрытие преимуществ и рисков. . Для диагностики геогельминтов и простейших у каждого пациента брали один исходный образец стула.Образцы были отправлены на паразитологическое исследование кала по методикам Ричи и Като-катца. Кроме того, была проведена молекулярная диагностика с помощью ПЦР для выявления присутствия ДНК Giardia (см. Ниже).

Лица с положительным диагнозом патогенных паразитов лечились в соответствии с руководящими принципами министерства здравоохранения Бразилии. При инфекциях Giardia пациентам давали метронидазол 15 мг / кг / день перорально (максимум 250 мг) в течение 5 или 7 дней в случае неэффективности лечения.Примерно через 20–35 дней после лечения был собран новый образец для определения контроля излечения. Лица, которые остались положительными, были подвергнуты второму циклу лечения метронидазолом, а затем повторно обследованы через 20 дней (второй контрольный курс лечения). Методология диагностики образцов вылеченного контроля была такой же, как и при первом обследовании.

Экстракция ДНК и молекулярная характеристика

G. lamblia

Образцы хранили при -20 ° C до молекулярной диагностики и определения характеристик.Экстракцию ДНК из цист проводили непосредственно из стула с использованием мини-набора QIAamp DNA Stool (Qiagen, Германия), в основном в соответствии с инструкциями производителя. Двумя исключениями были температура лизиса, которая была увеличена до 95 ° C, и объем буфера AE, используемый для элюции ДНК, который был уменьшен до 100 мкл. Выделенную ДНК хранили при -20 ° C до момента использования.

Для генотипирования G. lamblia использовали области консервативных генов, кодирующих глутаматдегидрогеназу ( gdh ) и бета-гиардин (β -gia ).Экстрагированную ДНК подвергали ПЦР и вложенной ПЦР (вторичная ПЦР) в конечном объеме 50 мкл реакции, содержащем 1X буфер для ПЦР, 3 мМ MgCl ₂ , 2,5 ЕД ДНК-полимеразы Taq (Invitrogen Life Technologies, Бразилия). 200 мкМ трифосфатдезоксирибонуклеотидов dNTP (Invitrogen Life Technologies, Бразилия) и 0,2 мкМ каждого праймера.

Для амплификации мишени gdh в первичной ПЦР использовались праймеры: GDH 1 (TTCCGTRTYCAGTACAACTC) и GDH 2 (ACCTCGTTCTGRGTGGCGCA), а во вторичной ПЦР: GDh4 (ATGACYGAGCTYCAGGGGCACG) в соответствии с GTCGCAH5 и др., 2008. Для амплификации мишени β -gia использовали праймеры в первичной ПЦР: G7 (AAGCCCGACGACCTCACCCGCAGTGC) и G759 (GAGGCCGCCCTGGATCTTCGAGACGAC) и во вторичной ПЦР: B-GIAF (GAACGAACGACGATCGAG) (CCTGTCGACGACGARGAG) (CCTGTGACGACGARGAG) согласно вторичной PCR: к Cacciò et al., 2002 и Lalle et al., 2005, соответственно.

В качестве положительного контроля использовали экстракты ДНК из аксенических культур клона C6 штамма WB G. lamblia (ATCC 50803). Отрицательные контроли включали ДНК, экстрагированную из аксенических культур Entameba histolytica и Trichomonas vaginalis .Успешность амплификации подтверждали электрофорезом в агарозном геле при концентрации 1%.

продуктов ПЦР для каждой пары праймеров очищали с использованием набора NucleoSpin Gel и PCR Clean-up (Macherey-Nagel, Германия) в соответствии с инструкциями производителя, за исключением времени инкубации в буфере NE, которое увеличили до 5 мин. Очищенные продукты подвергали секвенированию в обоих направлениях в трех экземплярах с использованием набора для циклического секвенирования BigDye Terminator v3.1 (Applied Biosystems, Foster City, США).После осаждения реакции образцы анализировали в службе секвенирования платформы ДНК-секвенирования FIOCRUZ (Otto et al., 2007). Каждый эксперимент проводился в трех экземплярах.

Полученные электрофореграммы были проанализированы на качество в программе Chromas 2.4. Характеристику последовательностей проводили с использованием инструмента поиска базового локального выравнивания с использованием нуклеотидов (BLASTn), и консенсус был получен с помощью программы сборки последовательностей CAP3. Нуклеотидные последовательности gdh и β -gia из G.lamblia были выровнены с помощью алгоритма CLUSTAL W (Thompson et al., 1994) в пакете Molecular Evolutionary Genetics Analysis (MEGA) 7.0 (Kumar et al., 2016).

Филогенетический анализ был выполнен с использованием программы MEGA 7.0, и использованная оценка расстояния была основана на уравнении Джина и Ней (1990) с использованием 2-параметров модели Кимуры). Последовательности новых изолятов в клинических образцах были сопоставлены с использованием последовательностей GenBank G. lamblia , принадлежащих ассоциациям A, B и E.В качестве внешних групп использовали последовательности из G. psittaci , G. muris и T. vaginalis . Соответствующие регистрационные номера последовательностей находятся между вертикальными чертами на филогенетических деревьях. Кроме того, последовательности фрагментов гена gdh и β -gia были объединены, и сообщалось о загрузке выше 60%.

Филогенетических деревьев были построены с использованием алгоритма объединения соседей (Saitou and Nei, 1987). Наилучшая статистическая модель была определена на основе самого низкого значения BIC, обнаруженного в MEGA (Kumar et al., 2016), где для обоих генов был выбран 2-параметр Кимуры. Для каждой конструкции достоверность каждой ветви определялась доверительным интервалом с помощью бутстрэп-анализа (1000 повторений) (Felsenstein, 1985). Характеристика последовательности G. lamblia , полученная из GenBank и использованная в качестве эталона для построения филогенетического дерева генов gdh и β -gia , представлена ​​в дополнительной таблице 2.

Программа обнаружения рекомбинации версии 4 (RDP4) использовалась для проверки событий рекомбинации в наших изолятах из клинических образцов, используя выравнивание конкатенированных последовательностей для генов gdh и β -gia (Martin et al., 2015). Наличие уникальной рекомбинации событий было подтверждено несколькими методами (RDP, GENECONV, BootScan, MaxiChi, Chimera, SiScan и 3Seq).

Оценка последовательности нуклеотидов в

G. lamblia Трофозоиты, непрерывно подвергающиеся действию метронидазола in vitro

Giardia lamblia трофозоитов из клона W6, штамм WB [ATCC50803], культивировали при 37 ° C в среде TYI-S-33 при pH 7,0 с добавлением 10% инактивированной фетальной бычьей сыворотки (Cultilab, Campinas, Brazil).Трофозоиты постоянно подвергались воздействию метронидазола (МТЗ) (Sigma Chemical Co., Сент-Луис, США) в течение минимум 16 недель. Экспериментальные группы определялись по концентрации воздействия МТЗ: группа 1 (МТЗ5) — 5 мкМ; группа (MTZ10) 2, 10 мкМ; группа 3 (MTZ20), 20 мкМ; группа 4 (СМТЗ) — без метронидазола; и группа 5 (CDMSO), подвергшаяся воздействию 0,05% диметилсульфоксида (Sigma, США), носителя для разведения MTZ. Концентрация, необходимая для подавления 50% роста паразитов (IC ₅₀ ), была определена с использованием методологии, описанной Bénéré et al., 2007. Анализы для каждой экспериментальной группы были выполнены в трех экземплярах, и результаты IC ₅₀ были определены с использованием программного обеспечения Prism 6.0 (GraphPad;). Для статистического анализа использовался тест ANOVA.

В конечный момент времени ДНК трофозоита G. lamblia экстрагировали с использованием ДНКзола (1 мл / 10 ⁷ паразитов; Invitrogen, Карлсбад, Калифорния, США). Последовательности gdh и β -gia были получены и проанализированы, как описано выше.

Результаты

Частота

G.lamblia Инфекция и определение устойчивости паразитов после лечения

Всего было взято 194 образца стула у детей, 109 женщин и 85 мужчин. При первом обследовании были обнаружены следующие паразиты: Ascaris lumbricoides (15/194 — 7,73%), Entameba histolytica / dispar (4/194 — 2,06%), Entameba coli (5/194 — 2,58%). ), Endolimax nana (13/194 — 6,70%) и G. lamblia (86/194 — 44,33%) (дополнительная таблица 1).Все пациенты с положительным результатом на G. lamblia получали метронидазол, и после лечения 36 оставались в исследуемой группе для оценки. В девятнадцати случаях после лечения они были представлены как хроническая инфекция и прошли второй курс лечения метронидазолом. При определении второго контрольного излечения 18 человек были повторно оценены. Из них у пятнадцати по-прежнему был поставлен положительный диагноз для G. lamblia (рис. 1). Эти случаи были индивидуально отслежены для других клинических подходов.

Рис. 1. Схематическое изображение положительности для Giardia lamblia в образцах фекалий детей в разные периоды исследования. Количество образцов, полученных в течение трех оценочных моментов исследования ( Giardia, PCR-выбор, 1-й контроль лечения и 2-й контроль лечения). Gia–: образцы с отрицательным диагнозом на Giardia по результатам ПЦР; Gia +: образцы с положительным диагнозом на Giardia с помощью ПЦР.

Генотипирование

G.lamblia Циркуляция у детей дошкольного возраста до и после лечения

ДНК G. lamblia , выделенная у 86 детей, положительных при первоначальном диагнозе, была генотипирована с использованием как gdh , так и β- gia в качестве мишеней. Мы наблюдали большую генетическую изменчивость изолятов из образцов. На основе согласованных последовательностей образцы были сгруппированы следующим образом: 40 изолятов в сборке A, 21 изолят в сборке B, 17 изолятов в сборке E и 4 изолята, показывающих характеристики как сборки A, так и E (Рисунки 2, 3).Многие различия наблюдались в подгруппах, характеризующих AI и AII.

Рис. 3. Филогенетическое дерево изолятов Giardia lamblia , собранных у детей до и после лечения, с помощью алгоритма объединения соседей с использованием двухпараметрического метода Кимуры. (A) Филогенетическое дерево, основанное на последовательностях гена глутаматдегидрогеназы . (B) Филогенетическое дерево на основе последовательностей гена бета-гиардина .Последовательности имен обозначаются их инвентарными номерами. Красный ромб: CC1: выделение из образца первого контроля отверждения и CC2: выделение из образца второго контроля отверждения.

После первого контрольного исследования излечения 36 диагностированных случаев все еще были положительными на инфекцию Giardia и были повторно оценены. Исходя из первоначального определения группы сборки, 19 изолятов были из ассоциации A, 5 изолятов из ассоциации B, 9 изолятов из ассоциации E и 3 изолята из ассоциации A / E.После второго курса лечения 13 из 19 детей из группы A, 2 из 5 из группы B, 2 из 9 детей из группы E и 2 из 3 детей из группы A / E оставались положительными. Генотипирование показало, что 18 из них были сгруппированы как сборка A (таблица 1 и рисунок 3 и дополнительный рисунок 1). Любопытно, что совокупности B или E не были обнаружены среди положительных индивидуумов (Рисунок 2 и Дополнительный Рисунок 1).

Таблица 1. Giardia lamblia скоплений, обнаруженных при первом диагнозе и после лечения.

Среди лиц, инфицированных группой A (11 субъектов) при первой оценке и в первом контрольном излечении, 9 изолятов продемонстрировали 100% идентичность между изолятами из образцов до и после обработки для двух использованных генных мишеней ( gdh и β -gia ). Три человека продемонстрировали генотипическое расхождение между изолятами из первой проанализированной оценки и первого контрольного лечения. Два показали различия в гене β -gia , а другие показали различия в мишени gdh .

После 2-го курса лечения 15 случаев продолжали оставаться положительными, при этом 13 изолятов были сгруппированы в комплекс А, что включало идентификацию уникального комплекса. Все последовательности из второго контроля лечения показали 100% идентичность с последовательностью того же человека в первом контроле лечения.

Три образца, которые были положительными после лечения, один из 1-й контрольной группы и два из 2-й контрольной группы, были амплифицированы, но не охарактеризованы.Три других изолята были генотипированы только на основе гена gdh .

Среди лиц, которые представили изоляты, сгруппированные как совокупность А в первом исследовании и в последовательных контрольных исследованиях, 8 случаев показали 100% идентичность изолятов во все три момента анализа.

При использовании RDP4 количество возможных уникальных рекомбинаций событий среди конкатенированных последовательностей было различным в зависимости от метода обнаружения (RDP: 13, GENECONV: 15, BootScan: 9, MaxiChi: 9, Chimera: 11, SiScan: 20, 3Seq: 19) .В области гена β -gia было обнаружено несколько событий рекомбинации (RDP: 0, GENECONV: 1, BootScan: 0, MaxiChi: 1, Chimera: 1, SiScan: 1, 3Seq: 2). Наибольшее количество рекомбинации наблюдалось в области гена gdh (RDP: 13, GENECONV: 9, BootScan: 6, MaxiChi: 6, Chimera: 6, SiScan: 9, 3Seq: 13). Оба изолята ассоциации B и E представили одно событие рекомбинации. Демонстрация одного и того же филогенетического профиля среди изолятов из каждого кластера сообщества. Все остальные события рекомбинации наблюдались в сборке A для мишени gdh.

Никаких изменений в нуклеотидных последовательностях

gdh и β -gia из G. lamblia Трофозоиты не наблюдались после in vitro Воздействие метронидазола

Значения IC ₅₀ групп MTZ5, MTZ10 и MTZ20 были значительно выше, чем значения, представленные контрольными группами SMTZ и CDMSO. Никаких различий в нуклеотидных последовательностях между группами не наблюдалось (представлено Lopes-Oliveira et al.). Эти результаты продемонстрировали, что, несмотря на серьезное вмешательство в выживаемость паразита, MTZ не вызывает изменений в оцениваемых консервативных генах.

Обсуждение

Передача G. lamblia более распространена в районах без элементарной санитарии (водоочистные и канализационные сети), что является реальностью в районах Бразилии с низкими доходами. Внутривидовые и межвидовые контакты могут способствовать распространению лямблиоза (Feng and Xiao, 2011), что является реальностью в регионах с низким уровнем доходов, где кошки и собаки могут свободно передвигаться, а также может находиться домашний скот. Эти множественные источники могут увеличить риск заражения, наряду с повторным заражением на G.lamblia и может объяснить высокую распространенность инфекции, наблюдаемую в настоящем исследовании. Однако неизвестно, связан ли профиль сборки Giardia с бременем инфекции.

Здесь были идентифицированы три группы G. lamblia (A, B и E), обнаруженные у человека. В нашем исследовании наблюдалась высокая скорость конвергенции между генными мишенями ( gdh и β -gia ), используемыми для генотипирования. Поскольку гены, используемые для генотипирования, считаются консервативными, ожидается хороший дискриминационный потенциал среди совокупностей (Ryan and Cacciò, 2013).Однако низкая нуклеотидная изменчивость, наблюдаемая среди подгрупп A, ставит под сомнение эффективность этих генов-мишеней для характеристики изолятов AI и AII, в основном (Lebbad et al., 2010, 2011; Ankarklev et al., 2018). Немногочисленные нуклеотидные изменения могут быть недостаточными или достаточными для дифференцировки на субсборки. Используя метод обнаружения для идентификации возможных уникальных событий рекомбинации, ген β -gia оказался более консервативным, чем ген gdh . Высокая скорость рекомбинации, наблюдаемая в группе А гена gdh , указывает на высокую вариабельность среди изолятов этой группы в данном исследовании.Это оправдывает расхождение характеристик между подгруппами AI и AII в генах-мишенях. Могут происходить события рекомбинации между подгруппами AI и AII и между ассоциациями A и E (Xu et al., 2012; Ankarklev et al., 2018). Мы обнаружили четыре случая несогласия между ассоциациями A и E, но в этом исследовании не наблюдалось событий рекомбинации. Об этом разногласии между сообществами часто сообщают (Cacciò et al., 2008).

Встречаемость ассоциации A была выше по сравнению с B или E.Немногочисленные отчеты, посвященные скоплениям Giardia в Бразилии, указывают на региональные различия в распространенности преобладающего циркулирующего сообщества (Coelho et al., 2017). В Рио-де-Жанейро комплекс A чаще всего идентифицируется у людей (Volotão et al., 2007; Fantinatti et al., 2016), хотя комплекс B (Faria et al., 2016) и комплекс E (Fantinatti et al. , 2016) уже сообщалось. Настоящие результаты согласуются и подтверждают опубликованный эпидемиологический профиль скоплений Giardia в нашем регионе.

В нашем предыдущем исследовании, проведенном в этом регионе, был идентифицирован комплекс E и особенно комплекс A (Fantinatti et al., 2016). Результаты здесь показывают, что циркуляция этих сообществ все еще существует, а группа A усиливается по всей окружающей среде домашними животными (Volotão et al., 2007; Fantinatti et al., 2018). Однако идентификация ассоциации B, циркулирующей у инфицированных детей, не была подтверждена, хотя в тот же период было сообщено о первой идентификации ассоциации B в Рио-де-Жанейро (Faria et al., 2016). Дальнейшие исследования образцов окружающей среды могут помочь понять преобладание сообщества A.

В Бразилии препаратом, наиболее часто используемым службой общественного здравоохранения для лечения лямблиоза, является метронидазол, и в большинстве случаев лечение оказывается эффективным. Однако реальная частота терапевтических неудач метронидазола в Бразилии до сих пор неизвестна. Наблюдаемый нами уровень продолжающейся инфекции после лечения метронидазолом считался высоким, поскольку 19 из 36 детей, прошедших повторную оценку, были инфицированы при первом контрольном излечении.Это продолжалось после второго контрольного лечения, когда 15 из 18 были положительными. Положительные случаи в контрольной группе излечения могут быть результатом терапевтической неудачи (субдоза препарата, устойчивость к паразитам) или повторного инфицирования (Argüello-García et al., 2004).

Отрицательные результаты лечения метронидазолом, скорее всего, являются терапевтическим успехом. Это событие наблюдалось у людей, инфицированных тремя разными сообществами. Было высказано предположение, что определенная совокупность может быть связана с длительным лямблиозом и случаями персистирования инфекции после лечения (Mørch et al., 2008). Изоляты из контрольных образцов лечения не были генотипированы как совокупность B или E. Это может свидетельствовать о том, что лечение было эффективным для устранения этих совокупностей. Однако нельзя утверждать, что эти ассоциации (B и E) более чувствительны к действию MTZ, чем группа A. Поскольку клонирование гена не проводилось в этом исследовании, невозможно исключить коинфекцию, и была обнаружена только одна совокупность. с помощью реакций секвенирования SANGER.

Поскольку в исследуемой общине плохие жилищные условия и плохие базовые санитарные условия, основная гипотеза состоит в том, что случаи стойких инфекций являются результатом последовательных инфекций.Это подтверждается теми случаями, когда совокупность, идентифицированная после цикла лечения, отличалась от первой оценки. Сборка А была единственной сборкой, идентифицированной при 1-м и 2-м контрольном отверждении. Принимая во внимание высокую частоту ассоциации A в районе наших исследований, наиболее вероятно повторное заражение этой группой. За исключением трех образцов, 100% идентичность наблюдалась между последовательностями, оцененными до и после у одного и того же человека. Хотя повторное заражение той же самой группой не может исключить за короткий период, в нашей области исследования в событиях повторного заражения ожидалось около половины детей, инфицированных совокупностями B или E в контрольном излечении (согласно первому обследованию).Это говорит о том, что следует учитывать терапевтическую неудачу и сопротивление.

Как упоминалось выше, три человека, которые сохраняли положительную реакцию на группу А после цикла лечения, показали генотипическое расхождение между первым проанализированным образцом и первым излеченным контролем. Нуклеотидные изменения, вероятно, не были следствием лечения, поскольку эти мишени не были изменены, когда трофозоитов Giardia были in vitro подвергнуты воздействию различных концентраций MTZ.Это предполагает, что эти люди были инфицированы другим штаммом того же сообщества, но с другим подтипом.

Результаты, полученные в нашей области исследования, показывают, что дети остаются в течение длительного времени инфицированными G. lamblia . Частые эпизоды повторного заражения и персистирование паразитов были замечательными открытиями в нашей области исследования. В регионах с высокой частотой инфицирования и повторного заражения также ожидается частое применение метронидазола. Однако пока невозможно определить, были ли рецидивирующие случаи связаны с лекарственной устойчивостью паразитов.Длительная паразитарная инфекция Giardia может вызвать снижение уровня жирорастворимых витаминов и стеаторею, а также задержку роста. Воздействие лямблиоза на развитие ребенка усиливает серьезность этого типа инфекции как проблемы общественного здравоохранения, которая, хотя в основном незаметна и не привлекает внимания общественности, требует более пристального внимания. Настоящие результаты поднимают вопрос для регионов с высокой частотой инфицирования, может ли лечение лямблиоза подвергать детей дополнительным побочным эффектам от препарата, одновременно маскируя потребность в мерах борьбы с паразитами, которые требуют изменений в государственной политике для поощрения инвестиций в улучшение санитарные условия.

Заявление о доступности данных

Наборы данных, представленные в этом исследовании, можно найти в онлайн-репозиториях. Названия репозитория / репозиториев и номера доступа можно найти в статье / Дополнительных материалах.

Заявление об этике

Исследования с участием людей были рассмотрены и одобрены Comitê de Ética em Pesquisa do Instituto Oswaldo Cruz (CEP FIOCRUZ / IOC). Письменное информированное согласие на участие в этом исследовании было предоставлено законным опекуном / ближайшими родственниками участников.

Авторские взносы

MF: концептуализация, методология, привлечение финансирования и написание рукописи. LL-O: методология. TC-F: методология. ПА-Т: методология. ЭВ: методология. АБ: формальный анализ. AD-C: концептуализация, привлечение финансирования и написание рукописи. Все авторы внесли свой вклад в статью и одобрили представленную версию.

Финансирование

Эта работа была поддержана внутренним финансированием Института Освальдо Круза (PAEF II-IOC-23-FIO-18-2-53), CNPq (Universal — 435015 / 2018-4).MF получил финансирование от Universal / CNPq (435015 / 2018-4). MF получил стипендию от CAPES (Brasil Sem Miséria / Бразильская правительственная программа) и CNPq (PDJ). AD-C имеет исследовательскую стипендию от CNPq и FAPERJ (CNE).

Конфликт интересов

Авторы заявляют, что исследование проводилось при отсутствии каких-либо коммерческих или финансовых отношений, которые могут быть истолкованы как потенциальный конфликт интересов.

Благодарности

Мы глубоко признательны Элизабет Сальгадо и команде яслей за их безоговорочную поддержку набора детей, а также команде Clinica da Familia из CMS Heitor Beltrão-SMS-RJ за клиническую помощь.Мы признательны доктору В. Провансу за его ценный критический обзор и английское издание. Мы хотим поблагодарить платформу для секвенирования ДНК — Fundação Oswaldo Cruz. Наконец, мы признательны доктору Октавио Фернандесу за то, что он предоставил нам основу для этого направления исследований.

Дополнительные материалы

Дополнительные материалы к этой статье можно найти в Интернете по адресу: https://www.frontiersin.org/articles/10.3389/fmicb.2020.571104/full#supplementary-material

Сноски

Список литературы

Адам, Р.Д. (2001). Биология Giardia lamblia . Clin. Microbiol. Ред. . 14, 447–475.

Google Scholar

Анкарклев, Дж., Леббад, М., Эйнарссон, Э., Францен, О., Ахола, Х., Троелл, К. и др. (2018). Новое мультилокусное типирование с высоким разрешением последовательности изолятов Giardia Кишечник группы А выявляет зоонозную передачу, клональные вспышки и рекомбинацию. Заражение. Genet. Evol. 60, 7–16. DOI: 10.1016 / j.meegid.2018.02.012

PubMed Аннотация | CrossRef Полный текст | Google Scholar

Аргуэльо-Гарсия, Р., Крус-Сото, М., Ромеро-Монтойя, Л., и Ортега-Пьер, Г. (2004). Вариабельность и вариабельность лекарственной чувствительности изолятов и клонов Giardia duodenalis , подвергшихся воздействию 5-нитроимидазолов и бензимидазолов in vitro . J. Antimicrob. Chemother. 54, 711–721. DOI: 10.1093 / jac / dkh488

PubMed Аннотация | CrossRef Полный текст | Google Scholar

Бенере, Э., да Луз, Р. А., Вермеерш, М., Кос, П., и Маес, Л. (2007). Новый количественный метод микрокультивирования in vitro для трофозоитов Giardia duodenalis . J. Microbiol. Методы 71, 101–106. DOI: 10.1016 / j.mimet.2007.07.014

PubMed Аннотация | CrossRef Полный текст | Google Scholar

Каччио, С. М., Бек, Р., Лалле, М., Маринкулик, А., и Позио, Э. (2008). Мультилокусное генотипирование Giardia duodenalis выявляет поразительные различия между комплексами A и B. Int. J. Parasitol. 38, 1523–1531. DOI: 10.1016 / j.ijpara.2008.04.008

PubMed Аннотация | CrossRef Полный текст | Google Scholar

Каччио, S.М., Де Джакомо, М., и Позио, Э. (2002). Анализ последовательности гена бета-гиардина и разработка анализа полиморфизма длины рестрикционного фрагмента полимеразной цепной реакции для цист Giardia duodenalis генотипа из образцов фекалий человека. Внутр. J. Parasitol. 32, 1023–1030. DOI: 10.1016 / s0020-7519 (02) 00068-1

CrossRef Полный текст | Google Scholar

Каччи, С. М., Лалле, М., Свярд, С. Г. (2018). Специфичность хозяина в комплексе видов Giardia duodenalis . Заражение. Genet. Evol. 66, 335–345. DOI: 10.1016 / j.meegid.2017.12.001

PubMed Аннотация | CrossRef Полный текст | Google Scholar

Коэльо, К. Х., Дуриган, М., Лил, Д. А. Г., Шнайдер, А. Б., Франко, Р. М. Б. и Сингер, С. М. (2017). Лямблиоз как забытое заболевание в Бразилии: систематический обзор публикаций за 20 лет. PLoS Negl. Троп. Дис. 11: e0006005. DOI: 10.1371 / journal.pntd.0006005

PubMed Аннотация | CrossRef Полный текст | Google Scholar

Эскобедо, А.А., Ханевик, К., Альмиралл, П., Цимерман, С., и Альфонсо, М. (2014). Ведение хронической инфекции Giardia . Expert Ver. Анти. Заразить. Ther. 12, 1143–1157. DOI: 10.1586 / 14787210.2014.942283

PubMed Аннотация | CrossRef Полный текст | Google Scholar

Фантинатти М., Белло А. Р., Фернандес О. и Да-Крус А. М. (2016). Идентификация комплекса E Giardia lamblia у человека указывает на новый антропозоонозный цикл. J. Infect.Дис. 214, 1256–1259. DOI: 10.1093 / infdis / jiw361

PubMed Аннотация | CrossRef Полный текст | Google Scholar

Фантинатти М., Казека А. К., Белло А. Р., Фернандес О. и Да-Крус А. М. (2018). Присутствие комплекса A Giardia lamblia у собак предполагает антропозоонозный цикл паразита в Рио-де-Жанейро, Бразилия. Заражение. Genet. Evol. 65, 265–269. DOI: 10.1016 / j.meegid.2018.07.025

PubMed Аннотация | CrossRef Полный текст | Google Scholar

Фариа, К.П., Занини, Г. М., Диас, Г. С., да Силва, С., и Соуза, М. К. (2016). Молекулярная характеристика Giardia lamblia : первое сообщение об ассоциации B в человеческих изолятах из Рио-де-Жанейро (Бразилия). PLoS One 11: e0160762. DOI: 10.1371 / journal.pone.0160762

PubMed Аннотация | CrossRef Полный текст | Google Scholar

Felsenstein, J. (1985). Пределы уверенности в филогении: подход, использующий бутстрап. Evolution. 39, 783–791. DOI: 10.2307/2408678

CrossRef Полный текст | Google Scholar

Гарднер Т. Б. и Хилл Д. Р. (2001). Лечение лямблиоза. Clin. Microbiol. Ред. 14, 114–128.

Google Scholar

Джин Л. и Ней М. (1990). Ограничения метода эволюционной экономии филогенетического анализа. Мол. Биол. Evol. 7, 82–102.

Google Scholar

Кумар, С., Стечер, Г., Тамура, К. (2016). MEGA7: анализ молекулярной эволюционной генетики, версия 7.0 для больших наборов данных. Мол. Биол. Evol. 33, 1870–1874. DOI: 10.1093 / molbev / msw054

PubMed Аннотация | CrossRef Полный текст | Google Scholar

Лалле, М., Поцио, Э., Капелли, Г., Бруски, Ф., Кротти, Д., и Каччио, С. М. (2005). Генетическая гетерогенность по локусу бета-гиардина среди изолятов Giardia duodenalis человека и животных и идентификация потенциально зоонозных субгенотипов. Внутр. J. Parasitol. 35, 207–213. DOI: 10.1016 / j.ijpara.2004.10.022

PubMed Аннотация | CrossRef Полный текст | Google Scholar

Lebbad, M., Mattsson, J. G., Christensson, B., Ljungström, B., Backhans, A., Andersson, J.O., et al. (2010). От мыши к лосю: мультилокусное генотипирование изолятов Giardia от различных видов животных. Вет. Паразитол. 168, 231–239. DOI: 10.1016 / j.vetpar.2009.11.003

PubMed Аннотация | CrossRef Полный текст | Google Scholar

Леббад, М., Петерссон, И., Карлссон, Л., Botero-Kleiven, S., Andersson, J.O., Svenungsson, B., et al. (2011). Мультилокусное генотипирование изолятов Giardia человека предполагает ограниченную зоонозную передачу и связь между комплексом B и метеоризмом у детей. PLoS Negl. Троп. Дис. 5: e1262. DOI: 10.1371 / journal.pntd.0001262

PubMed Аннотация | CrossRef Полный текст | Google Scholar

Леме, В., Захария, И., Невез, Г., Рабодонирина, М., Брассер, П., Балет, Дж. Дж. И др. (2000). Чувствительность к метронидазолу и альбендазолу 11 клинических изолятов Giardia duodenalis из Франции. J. Antimicrob. Chemother. 46, 819–821. DOI: 10.1093 / jac / 46.5.819

PubMed Аннотация | CrossRef Полный текст | Google Scholar

Мартин Д. П., Мюррелл Б., Голден М., Хосал А. и Мухир Б. (2015). RDP4: обнаружение и анализ паттернов рекомбинации в вирусных геномах. Virus Evol. 1: vev003.

Google Scholar

Мёрч К., Ханевик К., Робертсон Л. Дж., Стрэнд Э. А. и Лангеланд Н. (2008). Лечебная лестница и генетическая характеристика паразитов при рефрактерном лямблиозе после вспышки в Норвегии. J. Infect. 56, 268–273. DOI: 10.1016 / j.jinf.2008.01.013

PubMed Аннотация | CrossRef Полный текст | Google Scholar

Набарро Л. Э., Левер Р. А., Армстронг М. и Чиодини П. Л. (2015). Повышенная заболеваемость нитроимидазолрезистентным лямблиозом в больнице тропических болезней, Лондон, 2008–2013 гг. Clin. Microbiol. Заразить. 21, 791–796. DOI: 10.1016 / j.cmi.2015.04.019

PubMed Аннотация | CrossRef Полный текст | Google Scholar

Наш, Т.Э., Ол, К. А., Томас, Э., Субраманиан, Г., Кейзер, П., и Мур, Т. А. (2001). Лечение пациентов с рефрактерным лямблиозом. Clin. Заразить. Дис. 33, 22–28. DOI: 10.1086 / 320886

PubMed Аннотация | CrossRef Полный текст | Google Scholar

Отто Т. Д., Катанью М., Деграв В. и де Миранда А. Б. (2007). Платформа биоинформатики PDTIS: от последовательности к функции. Ред. Электрон. Сообщество. Инф. Инов. Saude 1, 286–294.

Google Scholar

Райан, У., и Каччио, С. М. (2013). Зоонозный потенциал лямблий. Int. J. Parasitol. 43, 943–956.

Google Scholar

Сайтоу Н. и Ней М. (1987). Метод объединения соседей: новый метод реконструкции филогенетических деревьев. Мол. Биол. Evol. 4, 406–425.

Google Scholar

Скалия, Л. А., Фава, Н. М., Соарес, Р. М., Лимонги, Дж. Э., да Кунья, М. Дж., Пена, И. Ф. и др. (2016). Мультилокусное генотипирование Giardia duodenalis у детей Бразилии. Пер. R. Soc. Троп. Med. Hyg. 110, 343–349.

Google Scholar

Томпсон, Дж. Д., Хиггинс, Д. Г., и Гибсон, Т. Дж. (1994). CLUSTAL W: повышение чувствительности прогрессивного множественного выравнивания последовательностей за счет взвешивания последовательностей, штрафов за пропуски в зависимости от позиции и выбора матрицы весов. Nucleic Acids Res. 22, 4673–4680. DOI: 10.1093 / nar / 22.22.4673

PubMed Аннотация | CrossRef Полный текст | Google Scholar

Торгерсон, П.R., Devleesschauwer, B., Praet, N., Speybroeck, N., Willingham, A.L., Kasuga, F., et al. (2015). Оценки Всемирной организации здравоохранения глобального и регионального бремени болезней, вызванных 11 паразитарными болезнями пищевого происхождения, 2010 г .: обобщение данных. PLoS Med. 12: e1001920. DOI: 10.1371 / journal.pmed.1001920

PubMed Аннотация | CrossRef Полный текст | Google Scholar

Волотао, А.С., Коста-Маседо, Л.М., Хаддад, Ф.С., Брандао, А., Перальта, Дж. М., и Фернандес, О. (2007). Генотипирование Giardia duodenalis из образцов человека и животных из Бразилии с использованием гена бета-гиардина: филогенетический анализ. Acta Trop. 102, 10–19. DOI: 10.1016 / j.actatropica.2007.02.010

PubMed Аннотация | CrossRef Полный текст | Google Scholar

Сюй Ф., Йерлстрём-Хультквист Дж. И Андерссон Дж. О. (2012). Полногеномный анализ рекомбинации позволяет предположить, что Giardia Кишечник, ассоциаций представляют разные виды. Мол. Биол. Evol. 29, 2895–2898. DOI: 10.1093 / molbev / mss107

PubMed Аннотация | CrossRef Полный текст | Google Scholar

Захеди, А., Филд, Д., Райан, У. (2017). Молекулярное типирование Giardia duodenalis у людей в Квинсленде — первое сообщение об объединении E. Parasitology 144, 1154–1161. DOI: 10.1017 / s0031182017000439

PubMed Аннотация | CrossRef Полный текст | Google Scholar

miRNA Giardia lamblia как новый инструмент диагностики лямблиоза человека

Аннотация

Фон

Giardia lamblia — очень частая причина желудочно-кишечных симптомов во всем мире.Существует несколько методов диагностики инфекции Giardia , но ни один из них не является идеальным. Мы стремимся найти новый метод на основе микроРНК, который улучшит существующие в настоящее время методы диагностики лямблиоза.

Методы

Глубокое профилирование последовательности малой РНК Giardia показало, что miR5 и miR6 высоко экспрессируются в Giardia . Эти миРНК были протестированы с помощью qRT-PCR в биопсиях двенадцатиперстной кишки пациентов с лямблиозом, которые были положительными при микроскопической патологической оценке.Биопсии желудка тех же пациентов служили тканями отрицательного контроля. Кроме того, эти miRNA оценивали в образцах стула пациентов с доказанным лямблиозом.

Результаты

Все гистологически подтвержденные биопсии двенадцатиперстной кишки у пациентов с инфекцией Giardia были положительны для Giardia miR5 со средним пороговым циклом (Ct) 23,7, а также для Giardia DNA qPCR (16S-подобный ген, средний Ct 26,3). ). Все биопсии желудка, которые были протестированы в качестве контроля, были отрицательными.Оценка miR6 в стуле у пациентов с лямблиозом показала 90% специфичность, но только 66% чувствительность, а с miR5 была получена более низкая степень точности.

Заключение

Giardia Тестирование miR5 при биопсии двенадцатиперстной кишки может быть новым методом диагностики лямблиоза. Это кажется более чувствительным по сравнению с тестированием ДНК Giardia методом кПЦР в биопсии двенадцатиперстной кишки. Будет важно изучить вклад рутинного тестирования miRNA Giardia в биопсию двенадцатиперстной кишки у пациентов со стойкими абдоминальными симптомами

Информация об авторе

Лямблиоз — основная причина диарейных заболеваний во всем мире.Это чаще встречается в районах с плохой санитарией, например, во многих странах с низким уровнем доходов, но также встречается и в странах с высоким уровнем доходов. Это наиболее часто обнаруживаемый кишечный паразит в Соединенных Штатах и ​​эндемик в других промышленно развитых странах. Возбудитель — жгутиковые простейшие Giardia lamblia , передача происходит в основном фекально-оральным путем. Основной метод диагностики — исследование кала. Обычно это обнаруживается при микроскопии кала, которую следует провести на свежем стуле и повторить через 3 дня.Несмотря на некоторые новые методы диагностики, Giardia по-прежнему трудно обнаружить, что часто приводит к ошибочной диагностике.

В этом исследовании мы показываем, что использование микроРНК Giardia (miR5) в качестве маркера инфекции Giardia при биопсии двенадцатиперстной кишки может быть новым методом диагностики лямблиоза. Он оказался более чувствительным, чем гистологический диагноз, а также более чувствительным, чем анализ ДНК Giardia при биопсии двенадцатиперстной кишки. Интересно, что у наших пациентов биопсия двенадцатиперстной кишки была сделана для стойких абдоминальных симптомов, и обнаружение Giardia в их биопсии было неожиданным.Таким образом, тестирование биопсии двенадцатиперстной кишки на Giardia miRNA у пациентов со стойкими абдоминальными симптомами может способствовать диагностике и своевременному лечению пациентов с лямблиозом.

Образец цитирования: Meningher T, Boleslavsky D, Barshack I, Tabibian-Keissar H, Kohen R, Gur-Wahnon D, et al. (2019) miRNAs Giardia lamblia, miRNA как новый инструмент диагностики лямблиоза человека. PLoS Negl Trop Dis 13 (6):
e0007398.

https://doi.org/10.1371/journal.pntd.0007398

Редактор: Майкл В. Гонт, Лондонская школа гигиены и тропической медицины, СОЕДИНЕННОЕ КОРОЛЕВСТВО

Поступила: 6 ноября 2018 г .; Одобрена: 16 апреля 2019 г .; Опубликован: 17 июня 2019 г.

Авторские права: © 2019 Meningher et al. Это статья в открытом доступе, распространяемая в соответствии с условиями лицензии Creative Commons Attribution License, которая разрешает неограниченное использование, распространение и воспроизведение на любом носителе при условии указания автора и источника.

Доступность данных: Все данные секвенирования были депонированы в омнибусе экспрессии генов NCBI (запись GEO GSE116101).

Финансирование: Исследование финансировалось за счет гранта программы I-CORE № 41/11 Израильского научного фонда (ISF) Бен-Дову З. Иддо. Кроме того, исследование финансировалось за счет гранта внутреннего гранта Медицинского центра Шиба под названием «Идентификация микроРНК в стуле как диагностический инструмент лямблиоза человека» Авни Дрор и Шварц Эли.Мы заявляем, что спонсоры не играли никакой роли в дизайне исследования, сборе и анализе данных, принятии решения о публикации или подготовке рукописи.

Конкурирующие интересы: Авторы заявили об отсутствии конкурирующих интересов.

Введение

Giardia lamblia (также известная как G . кишечник или G . duodenalis ) является возбудителем лямблиоза. Среди кишечных простейших паразитов он входит в тройку наиболее распространенных возбудителей диареи во всем мире [1]. Giardia видов имеют две стадии жизненного цикла; жгутиковый трофозоит, прикрепленный к микроворсинкам кишечника, и инфекционная киста, сохраняющаяся в окружающей среде [2]. Передача к человеку происходит либо при прямом контакте между людьми в средах с нарушенным уровнем гигиены [3], либо при загрязнении воды или пищи цистами, устойчивой формой. В промышленно развитых странах Giardia — наиболее распространенный паразит, обнаруживаемый в образцах стула [4, 5].Симптомы включают диарею, метеоризм, чрезмерную усталость, тошноту, неприятный запах стула, спазмы в животе и потерю веса. Примерно у 16% пациентов заболевание может стать хроническим с долгосрочными последствиями, такими как жидкий стул, недоедание, задержка роста, когнитивные нарушения, боли в животе, мальабсорбция и недомогание [6, 7].

У путешественников, возвращающихся из тропических стран, часто встречаются стойкие абдоминальные симптомы (ПАВ), включая хроническую диарею, боли в животе, метеоризм и усталость [8].К сожалению, в большинстве случаев этиология этих жалоб остается неизвестной, частично из-за низкой чувствительности текущих тестов. Только примерно в трети случаев можно идентифицировать патогены, наиболее распространенным из которых является Giardia [9]. Хотя большинство возвращающихся путешественников с хроническими жалобами остаются недиагностированными, многие из них, тем не менее, поддаются антипаразитарному лечению [8].

В настоящее время существует несколько методов диагностики для Giardia , но ни один из них не является настоящим золотым стандартом.Классически лабораторная диагностика проводится путем микроскопического исследования образцов кала, «исследования яйцеклеток и паразитов» (O&P) [10]. Рекомендуется собрать как минимум три независимых образца, предпочтительно водянистого стула, чтобы максимизировать чувствительность обнаружения. Кроме того, стул должен быть свежим, потому что трофозоиты очень быстро расщепляются [10]. Прямой флуоресцентный анализ на антитела и определение антигена в кале с помощью иммуноферментного анализа (ELISA) были признаны более чувствительными инструментами для диагностики лямблиоза и представляют собой потенциально привлекательную альтернативу традиционным исследованиям O&P [11, 12].Однако исследования показали, что для достаточной чувствительности требуется по крайней мере пара образцов стула [11]. Кроме того, в последние годы методы обнаружения нуклеиновых кислот на основе ПЦР показали более высокую чувствительность по сравнению с микроскопией и тестами на обнаружение антигенов [13]. Поскольку Giardia и паразитов обитают в тонком кишечнике, поиск их в двенадцатиперстной кишке представляется разумным [14]. Проспективное исследование, проведенное в Италии, выявило лямблиоз путем прямого гистологического исследования биоптатов двенадцатиперстной кишки у 9 из 137 пациентов (6.5%) с симптомами, соответствующими синдрому раздраженного кишечника (СРК), и без тревожных признаков [15].

miRNA представляют собой небольшие некодирующие регуляторные РНК, которые могут направлять посттранскрипционную репрессию синтеза белка из мРНК, содержащих сайты связывания miRNA. У животных miRNAs выполняют разнообразные биологические функции, включая регуляцию ключевых аспектов развития и жизненных циклов [16]. Эти молекулы также обнаружены в одноклеточных организмах, включая Giardia видов [17] (хотя существование канонической miRNA у этих примитивных эукариот обсуждается [18], поскольку в их геноме отсутствуют ортологи генов процессинга miRNA DROSHA и XPO5 [19]), и как потенциальные маркеры имеют то преимущество, что они частично специфичны для рода [20, 21] и относительно стабильны.Было показано, что миРНК устойчивы к циклическому замораживанию-оттаиванию, перевариванию РНКазой А и обработке раствором с высоким pH [22]. Кроме того, было показано, что miRNAs стабильны в образцах FFPE [23] и в фекалиях [24]. Таким образом, мы попытались идентифицировать Giardia в положительных биопсиях двенадцатиперстной кишки и образцах кала подтвержденных пациентов с лямблиозом путем обнаружения Giardia miRNAs с помощью количественной ПЦР с обратной транскрипцией.

Материалы и методы

Заявление об этике

Исследование было одобрено этическим комитетом Медицинского центра Шиба (Хельсинки), номер протокола 1335-14-SMC.Образцы FFPE были взяты из архива отделения патологии Медицинского центра Шиба. Требование информированного согласия было отменено из-за архивного характера исследуемых образцов FFPE. Контрольные образцы кала новорожденных были собраны после того, как матери были проинформированы и дали согласие. Анонимизированные замороженные образцы кала пациентов, инфицированных Giardia , были предоставлены одобренными Хельсинкским комитетом хранилищами паразитологической лаборатории Министерства здравоохранения Израиля и микробиологической лабораторией Медицинского центра Шиба.

Лямблии штаммы паразитов G . лямблий трофозоитов были получены из ресурсов BEI (https://www.beiresources.org/Home.aspx). WB clone 6 (NR-9706, сборка A [25]), Egypt-4 (NR-9231, сборка A), Mario (NR-9232, сборка A), Sug (NR-9233, сборка не определена) и G2M ( NR-9232, сборка не определена).

Лямблии Условия выращивания

Клетки Giardia выращивали в модифицированном Кейстером TYI-S-33 [26], который содержит: 2% казеина, 1% дрожжевого экстракта, 1% глюкозы, 0.2% NaCl, 0,2% L-цистеин, 0,02% L (+) — аскорбиновая кислота, 0,1% K ₂ HPO ₄ · 3H ₂ O, 0,06% KH ₂ PO ₄ , 0,00228% цитрат аммония и железа (III) 1% раствор бычьей желчи (все от sigma) и 10% бычья телячья сыворотка (Gibco) в бидистиллированной воде (DDW). Трофозоиты выращивали в пробирке для культивирования клеток из полистирола (Greiner bio-one, Cellstar, Cat. № 163–160) при 37 ° C в анаэробных условиях.

Извлечение РНК из трофозоитов и профилирование миРНК с помощью секвенирования малых РНК

Тотальную РНК экстрагировали из одного миллиона трофозоитных клеток каждого изолята Giardia с использованием набора для выделения miRNA mirVana (Ambion, AM1561).Библиотеки кДНК со штрих-кодом для малых РНК (19–35 нуклеотидов) были получены из полной РНК с использованием собственного метода, как описано ранее [27]. Библиотеки были подвергнуты глубокому секвенированию на секвенаторе Illumina (HiSeq 2500). Кроме того, чтобы облегчить обнаружение miRNA, которое требует идентификации считываний цепи-пассажира, которые обычно редки по сравнению со зрелой цепью, мы подвергли библиотеки кДНК расщеплению дуплекс-специфической нуклеазой (DSN, Evrogen, cat. # EA003) [ 28], а также секвенировали расщепленные библиотеки.Полученные файлы чтения FASTQ были обработаны, как описано [29], и демультиплексированные данные были депонированы в омнибусе экспрессии генов NCBI (запись GEO GSE116101).

Биоинформатический анализ

Обнаружение miRNA в демультиплексированных библиотеках было выполнено с использованием алгоритма miRDeep2 [30]. Для этого мы объединили файлы FASTQ библиотеки интактной и расщепленной DSN кДНК. Мы позволили включить в анализ чтения длиной до 29 нт, в отличие от 25 нт по умолчанию, потому что предыдущее исследование малых РНК, ассоциированных с аргонавтом в Giardia , показало, что длина моды составляет 26 нт [17], что соответствует структурное моделирование Giardia Dicer [31].Ранее сообщалось, что предполагаемая miRNA Giardia ( S1 Table , адаптированная из Liao et al [17-19, 32-37]) была специально исследована путем включения их в качестве предполагаемых известных зрелых miRNA в анализ miRDeep2. Для картирования генома мы загрузили файл GiardiaDB-37_GintestinalisAssemblageAWB_Genome.fasta (2018-04-19) из GiardiaDB.

Образцы пациентов

блока ткани двенадцатиперстной биопсии FFPE у пациентов с подтвержденным гистопатологическим подтверждением лямблиоза были получены из отделения патологии Медицинского центра Шиба.Кроме того, в качестве отрицательного контроля использовались биопсии желудка от одних и тех же пациентов и от неродственных пациентов. Образцы кала у пациентов с лямблиозом с подтвержденным антигеном и / или микроскопией были собраны в Институте географической медицины и тропических болезней Медицинского центра Шиба и в лаборатории паразитологии Министерства здравоохранения Израиля, Иерусалим. Образцы фекалий отрицательного контроля были собраны у новорожденных и у младенцев, которые только начали есть, но все еще не посещают детский сад.Образцы стула хранили при -80 ° C до анализа.

Экстракция ДНК и РНК из FFPE

ДНК

экстрагировали из 10-20 срезов блоков ткани FFPE с помощью набора QIAamp DNA Mini (Qiagen, 51304) в соответствии с протоколом производителя с небольшими изменениями. Инкубацию с протеиназой К проводили в течение ночи, а затем добавляли дополнительную протеиназу К на 1 час. После добавления буфера AL и этанола образцы инкубировали при -20 ° C в течение 1 часа. Последующие шаги выполнялись согласно протоколу.Выделение РНК из биоптатов FFPE выполняли с использованием набора miRNeasy FFPE (Qiagen, 217504) в соответствии с протоколом производителя.

Экстракция РНК из образцов стула человека

0,1 г стула добавляли к 200 мкл 2% суспензии поливинилполипирролидона (PVPP, Sigma) и замораживали при -20 ° C в течение ночи. Затем суспензию нагревали 10 мин при 100 ° C [1]. Выделение miRNA из суспензии выполняли с использованием набора для выделения miRNA mirVana (Ambion, AM1561) в соответствии с протоколом производителя.

кОТ-ПЦР / кПЦР в реальном времени

Система ПЦР в реальном времени ABI Quant Studio6 Flex (Applied Biosystems, Фостер-Сити, Калифорния, США) использовалась во всех экспериментах с qRT-PCR и qPCR.

Одноэтапная qRT-PCR

Обнаружение miРНК, выделенных из образцов фекалий, по технологии Eva Green, проводили, как описано ранее [38, 39].

Праймеры для обнаружения miRNA

Giardia в образцах фекалий

Лямблии miR5

RP1-miR5: 5′-GGACGGTAGCAAGCAAAGAGAGAGAAGGCTCGGACAT-3 ‘

RP2-miR5: 5′-GGGATTCTGGAAGATGATGATGACGATGCTTCCTTGG-3 ‘

P1: 5′-GGACGGTAGCAAGCAAAGAGAGAG-3 ‘

P2: 5′-GGGATTCTGGAAGATGATGATGAC-3 ‘

Лямблии miR6:

RP1-miR6: 5′-GGACGGTAGCAAGCAAAGAGAGAGCAGAATACGACAAA-3 ‘

RP2-miR6: 5′-GGGATTCTGGAAGATGATGATGACGACGCGTGACGAAG’-3 ‘

P1: 5′-GGACGGTAGCAAGCAAAGAGAGAG-3 ‘

P2: 5′-GGGATTCTGGAAGATGATGATGAC-3 ‘

RNU6B человека:

RP1-RNU6B: 5′-GGACGGTAGCAAGCAAAGAGAGAGAAAAATATGGAACGCTTCACGAA-3 ‘

RP2-RNU6B: 5′-GGGATTCTGGAAGATGATGATGACCGCAAGGATGACACGCAAA-3 ‘

P1: 5′-GGACGGTAGCAAGCAAAGAGAGAG-3 ‘

P2: 5′-GGGATTCTGGAAGATGATGATGAC-3 ‘

TaqMan микроРНК qRT-PCR

qRT-PCR miRNAs, выделенных из образцов FFPE, была проведена в соответствии с протоколом производителя (Applied Biosystems) с использованием специальных праймеров, разработанных в соответствии с методом количественной оценки miRNA Applied Biosystems [40], либо для Giardia miR5 (Applied Biosystems Assay-ID 5737335_1), либо для Giardia miR6 (Applied Biosystems Assay-ID 5710263_1).

TaqMan ДНК кПЦР

КПЦР ДНК, выделенной из образцов FFPE, проводили со специфическими праймерами для гена малой субъединицы рибосомной (16S-подобной) РНК Giardia с помощью TaqMan qPCR, как описано Verweij et al. [1].

Статистика

Статистическую значимость оценивали с помощью t-критерия Стьюдента или однофакторного дисперсионного анализа. Значение вероятности p <0,05 считалось значимым. Для сравнения Ct miR5 с Ct ДНК использовали парный t-критерий Стьюдента.Непарный t-критерий и площадь под кривой рабочих характеристик приемника (ROC) и пороговое значение Ct были рассчитаны с использованием GraphPad Prism версии 5.00 для Windows, GraphPad Software, Сан-Диего, Калифорния, США, www.graphpad.com. Вкратце, после ввода значений Ct (инфицированный и здоровый контроль) предлагается ряд пороговых значений. График отображает процентную чувствительность по сравнению с процентом ложноположительных результатов (100-специфичность) для различных точек отсечения. Оптимальный порог определяется как порог с наивысшим отношением правдоподобия [определяемый как% чувствительности / (100% специфичность)].Данные кривой ROC представлены в таблицах S2 и S3.

Результаты

Характеристика

лямблий miRNA

Выращивали пять различных изолятов Giardia . Полная РНК была извлечена, и небольшие библиотеки РНК были подготовлены и глубоко секвенированы. Результаты и идеи этого анализа транскриптома малых РНК представлены в приложении S1 . Наши данные глубокого секвенирования подтвердили присутствие считываний, происходящих от двух предполагаемых miRNA, которые, как ранее сообщалось, имеют самые высокие уровни экспрессии в трофозоитах Giardia, , miR5 и miR6 [17], и они были использованы для последующих анализов образцов пациентов.Кроме того, эти две miRNA консервативны между тремя основными сообществами, инфицирующими людей; A, B и E. miR5 имеет длину 26 нуклеотидов и идентична на 100% во всех трех группах. miR6 имеет длину 28 нуклеотидов и на 100% идентичны в сборках A и E, а 24 из 28 идентичны в сборках B (таблица S1).

Обнаружение

Giardia miRNA в биоптатах двенадцатиперстной кишки человека

Были изучены восемь биопсий двенадцатиперстной кишки, которые были определены патологом как положительные Giardia .Образцы были взяты у пациентов, направленных на гастроскопию из-за длительных жалоб со стороны желудочно-кишечного тракта или анемии (таблица 1), но у них не был диагностирован лямблиоз до гастроскопии. РНК и ДНК экстрагировали из биопсийного материала и анализировали с использованием анализа TaqMan® MicroRNA Assay и анализа TaqMan qPCR DNA соответственно. Как видно из таблицы 1, все образцы были положительными для Giardia miR5 со средним пороговым значением цикла (Ct) 23,7. miR6 в основном не определялся и поэтому не исследовался в биопсии двенадцатиперстной кишки.Мы также выполнили тест qPCR для ДНК Giardia с использованием специфических праймеров для гена малой субъединицы рибосомной (16S-подобной) РНК Giardia с помощью TaqMan qPCR, как описано Verweij et al. [1]. Сравнение уровней Ct ДНК Giardia miR5 и Giardia на тех же образцах с использованием эквивалентных объемов экстрагированной нуклеиновой кислоты показывает, что miR5 дает более низкие средние значения Ct, 23,7 против 26,3 (по парному t-критерию p = 0,004). Эти находки предполагают, что амплификация miRNA может быть более устойчивой, чем амплификация ДНК.

В качестве отрицательного контроля мы использовали биопсию желудка, которая, как ожидается, не содержит паразитов Giardia . Во-первых, мы использовали 4 доступные биопсии желудка от 8 пациентов, упомянутых выше, с положительной гистологией двенадцатиперстной кишки. В самом деле, в биоптатах желудка этих пациентов miR5 не был обнаружен (Таблица 1). Шесть дополнительных биопсий желудка от случайно выбранных пациентов, перенесших гастроскопию по разным причинам, показали значения Ct выше 34. В целом во всех 10 контрольных биопсиях значения Ct miR5 были выше 34 при среднем значении 35.9 (± 1,6) по сравнению с 23,7 (± 4,0) в положительных случаях (p <0,0001) (рис. 1).

Рис. 1. Обнаружение Giardia miR5 в биоптатах двенадцатиперстной кишки человека.

РНК

была извлечена из 8 биопсий двенадцатиперстной кишки пациентов с положительным результатом на лямблии, или в качестве контрольной группы, из 4 биопсий желудка у пациентов с положительным результатом на лямблии, и из 6 случайных биопсий желудка. РНК подвергали qRT-PCR (см. «Методы») со специфическими праймерами для miR5. Каждая точка представляет образцы пациента или контрольной группы.Среднее значение ± SEM изображено горизонтальными линиями. ***, P <0,0001, рассчитано с помощью непарного t-критерия.

https://doi.org/10.1371/journal.pntd.0007398.g001

Применяя анализ кривой рабочих характеристик приемника (ROC), мы получили высокочувствительные и специфические результаты. Расчетная площадь под кривой (AUC) для miR5 составила 1, что соответствует идеальному тесту; [41]. Оптимальный порог определяется как порог с наивысшим отношением правдоподобия [отношение правдоподобия определяется как% чувствительности / (100% специфичность)].С miR5, Ct <33,5 дает 100% чувствительность и специфичность и, следовательно, отношение правдоподобия ∞ (95% доверительные интервалы - чувствительность от 63,1% до 100,0%, специфичность от 59,0% до 100,0%) (рис. 2) и таблица S2.

Рис. 2. Анализ кривой ROC.

Анализ площади под кривыми ROC (AUC) выполняли со значениями Ct для Giardia miR-5 в качестве предикторов для категории заболевания (инфицированный = положительный результат в двенадцатиперстной кишке / контроль = желудочный) в качестве переменной ответа (красные линии). Значение P = 0,0002.Кривая ROC была построена с помощью GraphPad Prism версии 5.00 для Windows. Диагональная черная линия отражает результаты диагностического теста не выше случайного уровня.

https://doi.org/10.1371/journal.pntd.0007398.g002

Чтобы определить минимальное количество паразитов Giardia , которое может быть обнаружено с помощью miR5 qRT-PCR, мы использовали модель in vitro, выделенную из паразитов. , и коррелировал количество клеток паразита с чтением Ct (рис. 3). Как видно, при разведении 10 ⁴ мы насчитали ~ 8 паразитов со значением Ct 33.1, немного ниже порогового значения 33,5 Ct, определенного выше. Таким образом, нижний предел обнаружения нашего анализа miR5 может составлять 8 клеток паразита.

Рис. 3. Расчет in vitro значения Ct miR5 qRT-PCR в зависимости от количества паразитов.

Штамм WB Giardia выращивали в культуре. Подсчитывали количество паразитов и разбавляли, как показано в таблице. Из каждого разведения экстрагировали РНК и подвергали кОТ-ПЦР. График представляет собой среднее значение трех повторов и логарифм концентрации паразитов в зависимости от полученного значения Ct.

https://doi.org/10.1371/journal.pntd.0007398.g003

Интересно, что 3 пациента с подозрением на лямблиоз, приобретенный в поездках, без доказательств наличия Giardia при гистологическом исследовании ткани двенадцатиперстной кишки и микроскопии кала были проанализированы на miR5 в двенадцатиперстная кишка. У одного из этих пациентов биопсия, которая была взята до лечения, дала значение Ct miR5 31,0, положительное для инфекции Giardia , в то время как биопсии двух других пациентов, которые были взяты после лечения против лямблиоза, дали пограничные уровни Ct, 33.8 и 34 (таблица 2). Симптомы всех трех пациентов отреагировали на лечение антибиотиком Giardia .

Обнаружение

miRNA Giardia в образцах стула

19 образцов стула были собраны и включены в исследование. Было взято 9 образцов стула у пациентов, страдающих диареей с подтвержденным лямблиозом. В контрольной группе у здоровых младенцев было взято 10 проб стула; 6 новорожденных и 4 малыша в возрасте от 1 до 1,5 лет, которые только начали есть твердую пищу и еще не поступили в детский сад.Образцы пациентов были проверены на наличие Giardia тремя различными методами: микроскопическим исследованием (O&P), ELISA и ДНК-ПЦР. Образцы считались положительными, если по крайней мере два из вышеупомянутых диагностических методов были положительными.

Было выполнено измерение miR5 и miR6 в образцах кала пациентов. РНК из стула была извлечена, и был проведен одностадийный анализ ОТ-ПЦР в реальном времени [39], анализ, который мы использовали ранее, успешно идентифицирующий очень небольшое количество miRNA [38].Как видно на фиг. 4, значительная разница была обнаружена для miR6 между положительными пациентами по сравнению со здоровыми людьми (p = 0,0025). Мы применили анализ кривой ROC, чтобы оценить точность нашего теста. Как показано на рис. 5, точность анализа присутствия miRNA Giardia , выделенных из образцов кала инфицированных пациентов, была средней; с AUC для miR6 0,88. Отношение правдоподобия для miR6, основанное на чувствительности 66,6% и специфичности 90%, составило Ct 30,0 (таблица 3S).

Рис. 4. Обнаружение Giardia miR6 в кале человека.

РНК

экстрагировали из фекалий и подвергали одностадийной ОТ-ПЦР (см. Методы) со специфическими праймерами для miR6. Каждая точка представляет собой образцы пациента или здорового человека. Среднее ± SEM обозначено горизонтальными линиями. **, значение P 0,0025 рассчитано с помощью непарного t-критерия.

https://doi.org/10.1371/journal.pntd.0007398.g004

Рис. 5. Анализ кривой ROC.

Анализ площади под кривыми ROC (AUC) выполняли со значениями Ct для Giardia miR6 в качестве предикторов для категории заболевания (инфицированный = положительный стул / контроль = отрицательный стул) в качестве переменной ответа (красные линии).Значение P = 0,0043. Кривая ROC была построена с помощью GraphPad Prism версии 5.00 для Windows. Диагональная черная линия отражает результаты диагностического теста не выше случайного уровня.

https://doi.org/10.1371/journal.pntd.0007398.g005

В отличие от miR6, при измерении miR5 его уровни не различались между инфицированными и здоровыми образцами (данные не показаны), что подразумевает неспецифичность (ложь). -положительный) усиление.

Обсуждение

Лямблиоз — серьезное заболевание, которое не диагностируется.В этом исследовании наша цель состояла в том, чтобы найти новый метод, который внесет вклад в современные доступные методы диагностики инфекции Giardia . Для этого мы решили сосредоточиться на молекулах miRNA Giardia из-за их стабильности, что делает их хорошими кандидатами на выживание при сложных методах экстракции. Тот факт, что молекулы miRNA не существуют в бактериях, составляющих большую часть кишечной флоры, делает их многообещающими с точки зрения специфичности. Использование miRNA для диагностики паразитарных инфекций находится на пике [17] и, насколько нам известно, никогда не использовалось для диагностики инфекции Giardia .

Нам известно о дискуссии о том, имеет ли Giardia bona fide miRNA. Однако это обсуждение менее актуально для нашей работы. Точное биохимическое определение и функция этих малых РНК имеют меньшее значение с точки зрения их потенциала в качестве биомаркеров. Тем не менее, поскольку анализируемая нами малая РНК уже была названа другими как miRNA, мы сохранили эту номенклатуру (например, miR5 и miR6).

Мы провели глубокий анализ секвенирования малых РНК, выделенных из 5 различных изолятов Giardia .Основываясь на их изобилии в наших данных, а также в предыдущих отчетах Saraiya et al и Liao et al [17, 18, 36], мы решили сосредоточиться на двух молекулах — miR5 и miR6, которые, по данным анализа BLAST, не являются родственны человеческому геному и транскриптому.

Поскольку Giardia находится в верхнем отделе кишечника, мы решили проверить наличие двух выбранных нами молекул в образцах биопсии двенадцатиперстной кишки от 8 пациентов, у которых при гистологическом исследовании было обнаружено Giardia паразитов (Таблица 1).Эти 8 пациентов были направлены на гастроскопию в связи с продолжительными жалобами со стороны желудочно-кишечного тракта. Интересно, что ни у одного из этих пациентов не было подозрений на лямблиоз до гастроскопии.

Все восемь образцов, признанных положительными в результате патологии, были подтверждены как положительные с помощью теста ДНК-ПЦР для Giardia . Применение qRT-PCR для Giardia miR5 также было положительным во всех образцах. Интересно, что miR6 оказался менее эффективным, более того, в 4 из 8 образцов мы его вообще не обнаружили (табл. 1).Это может быть связано с тем, что наши праймеры были сконструированы для miR6 сборок A, и, как показано в таблице S1, между miR6 сборки A и сборкой B есть 4 нуклеотида. Интересно, хотя мы экстрагировали ДНК и РНК из одинакового количества слайдов FFPE, мы идентифицировали miR5 в более низких циклах Ct, что может указывать на надежность miR5 по сравнению с тестированием ДНК. Используя биопсию желудка в качестве отрицательного контроля, мы действительно обнаружили, что miR5 не был обнаружен даже у пациентов, у которых в образце двенадцатиперстной кишки было Giardia .Кроме того, все контрольные биопсии желудка у пациентов, не относящихся к Giardia, были отрицательными на miR5.

У нас было три дополнительных случая с клиническим подозрением на лямблиоз, но с отрицательным диагнозом Лямблии традиционными методами и отрицательными результатами биопсии двенадцатиперстной кишки (Таблица 2). Один из этих пациентов был miR5-положительным с Ct 31 (наше расчетное пороговое значение составляет 33,5). Двум другим пациентам была сделана биопсия после эмпирического лечения, и в соответствии со значениями Ct 33,8 и 34,0 их можно было классифицировать как пограничные или отрицательные после лечения для Giardia miRNA.Более того, хотя у нас нет дополнительных подтверждающих доказательств того, что у этих трех пациентов был лямблиоз, все трое ответили на лечение анти- Giardia . Как можно видеть на фиг. 3A и 3B, мы построили калибровочную кривую отношения Ct, полученного в qRT-PCR для miRNA Giardia , к количеству подсчитанных клеток паразита. На основе этой кривой Ct 33,0 указывает на 8 клеток паразита. Следовательно, поскольку наш расчетный порог для положительной инфекции составляет 33,5, можно предположить, что qRT-PCR может обнаружить всего 8 паразитов, в то время как на основе среднего уровня Ct (23.7) при гистологически положительной биопсии необходимо в 100–1000 раз выявить больше паразитов с помощью гистопатологии (рис. 3), что свидетельствует о преимуществах обнаружения miRNA с помощью qRT-PCR при биопсии двенадцатиперстной кишки. Кроме того, эти положительные случаи miRNA Giardia были отрицательными для ДНК Giardia , что также усиливает превосходство miRNA над ДНК при биопсии двенадцатиперстной кишки.

Как уже упоминалось, ни у одного из пациентов исследовательской группы не было подозрений на лямблиоз до диагностической гастроскопии (Таблица 1).Это говорит о том, что в Израиле и, вероятно, в промышленно развитом мире в целом действительно недостаточно диагностировано Giardia инфекций. Кроме того, мы предполагаем, что лямблиоз — недиагностируемое заболевание из-за низкой чувствительности современных диагностических инструментов. Это предположение было сделано при наблюдении за пациентами с хроническими желудочно-кишечными заболеваниями, некоторые из которых были возвращающимися путешественниками из тропиков. У этих пациентов были отрицательные анализы кала на паразитов, и у них остался предположительный диагноз синдрома раздраженного кишечника, однако эмпирическое лечение протозойными препаратами привело к значительному улучшению у 70% [8].

Ранние исследования показали, что одной биопсии двенадцатиперстной кишки может быть недостаточно для диагностики лямблиоза. В одном из исследований было высказано предположение, что двух образцов может быть достаточно для диагностики всех случаев, вероятно, из-за неоднородного распределения паразитов в двенадцатиперстной кишке [42].

Сравнение образцов дуоденального аспирата с образцами биопсии у пациентов с лямблиозом дало неоднозначные результаты в разных исследованиях. Некоторые исследования показали превосходство образцов аспирата двенадцатиперстной кишки над биопсией слизистой оболочки двенадцатиперстной кишки [43].Другие показали, что биопсия слизистой оболочки двенадцатиперстной кишки более чувствительна по сравнению с образцами аспирата двенадцатиперстной кишки [44].

В обоих исследованиях использовалось гистологическое исследование, и оба показали, что образцы аспирата двенадцатиперстной кишки или биопсия слизистой оболочки двенадцатиперстной кишки были более точными по сравнению с исследованием кала.

Фуад и его коллеги подвергли образцы стула и аспират двенадцатиперстной кишки 120 пациентам с диспепсией на ПЦР-анализ на ДНК Giardia и провели поиск микроорганизмов в образцах биопсии двенадцатиперстной кишки. Лямблии были обнаружены методом ПЦР в аспирате двенадцатиперстной кишки в 23 случаях, но микроорганизмы присутствовали в образцах биопсии только у 2 из этих пациентов (чувствительность 9%). В то время как исследование, проведенное в условиях высокой распространенности, показало, что у 44% (96/220) пациентов, перенесших гастродуоденоскопию из-за симптомов диспепсии, при биопсии двенадцатиперстной кишки было Giardia [45]. В этом исследовании показалось, что диагностика двенадцатиперстной кишки намного более чувствительна, чем микроскопия кала, так как только в небольшом количестве из них (5/85, 6%) Giardia паразитов были обнаружены при исследовании кала.

В последней части нашего исследования мы стремились обнаружить молекулы miR5 и miR6 в образцах кала пациентов с доказанным лямблиозом (которые были признаны положительными по крайней мере в двух альтернативных тестах кала). В качестве контрольной группы мы выбрали две популяции. Первыми были новорожденные, которые предположительно еще не подверглись воздействию паразита. Вторую контрольную группу составили малыши без братьев и сестер, которые еще не начали посещать детский сад, но перестали кормить грудью и начали есть твердую пищу.У этих групп была относительно небольшая вероятность контакта с Giardia . Результаты нашего исследования показали умеренную точность со специфичностью 90% и чувствительностью только 66,7% при диагностике инфекции Giardia с использованием miR6 в кале. Результаты количественного определения miR5 в кале были еще менее точными.

Похоже, что идентификация молекул miRNA Giardia в образцах двенадцатиперстной кишки показывает больший потенциал, чем в образцах кала. Извлечение miRNA из парафина несложно и менее подвержено фоновому шуму, который существует в стуле из-за тяжелой бактериальной нагрузки. Лямблии паразитов обитают в двенадцатиперстной кишке, где они достигают высокого количества клеток, тогда как в стуле их количество относительно невелико, а выведение является периодическим. Тот факт, что miR5 был идентифицирован в образцах двенадцатиперстной кишки, но не в образцах кала, и наоборот miR6, предполагает различия в экспрессии молекул miRNA между трофозоитами Giardia (существуют в двенадцатиперстной кишке) и цистами Giardia (существуют в стуле). Созданные нами библиотеки miRNA были получены в результате секвенирования культур Giardia в его трофозоитной форме.Это также основная форма паразита, обитающая в двенадцатиперстной кишке, хотя и в другой среде.

Основным ограничением нашего исследования является относительно небольшое количество выборок как в экспериментальной, так и в контрольной группах. Другое ограничение состоит в том, что мы оценили только две молекулы miRNA.

В заключение, тестирование miR5 на инфекцию Giardia при биопсии двенадцатиперстной кишки может быть прорывным методом диагностики лямблиоза, который потенциально может быть более чувствительным, чем существующие методы.Очевидно, мы не предлагаем биопсию двенадцатиперстной кишки каждому пациенту с подозрением на лямблиоз. Однако мы считаем, что кОТ-ПЦР для микроРНК Giardia должна быть одним из тестов у пациентов, подвергающихся эндоскопическому обследованию для выявления недиагностированных стойких абдоминальных симптомов.

Мы хотим подчеркнуть тот факт, что биопсия двенадцатиперстной кишки в наших образцах была взята у пациентов, которые страдали стойкими абдоминальными симптомами и не подозревались на заражение Giardia . Только патологоанатом неожиданно обнаружил Giardia при биопсии двенадцатиперстной кишки.Таким образом, мы считаем, что qRT-PCR для miRNA Giardia должна быть одним из тестов, которые проходят такие пациенты. Следовательно, было бы важно продолжить изучение вклада тестирования miRNA Giardia в биопсию двенадцатиперстной кишки и аспират двенадцатиперстной кишки у пациентов со стойкими абдоминальными симптомами.

Вспомогательная информация

Папка S1. Алгоритм miRDeep2 (когда допустимо, чтобы до 50% отображенных считываний несовместимы с обработкой Dicer) выдал 58 новых предложений для предшественников miRNA, которые показаны в этой папке.

Файл result_16_06_2018_t_13_52_59.html является индексом, через который можно получить доступ к графику pdf.

https://doi.org/10.1371/journal.pntd.0007398.s002

(ZIP)

S1 Текст. Результат анализа miRDeep2 для поиска известных и новых miRNA в библиотеках малых РНК 5

изолятов трофозоитов Giardia (запускается с опцией «-t», чтобы в выходные данные включались дисквалифицированные предшественники).

В выходных данных показаны свернутые накопления чтения для каждого предложенного предшественника miRNA и перечислены причины дисквалификации.Последовательности отсортированы по количеству и указана их исходная библиотека. Например, последовательность «Gi3_88_x63185» была найдена 63185 раз в библиотеке Gi3

.

https://doi.org/10.1371/journal.pntd.0007398.s003

(PDF)

S2 Таблица. Данные Giardia miR5 в биопсии двенадцатиперстной кишки человека, результаты Ct в реальном времени и данные кривой ROC.

Расчет оптимального отсечения, определяемого как отсечение с наивысшим отношением правдоподобия [определяется как% чувствительности / (100% специфичность)].

https://doi.org/10.1371/journal.pntd.0007398.s005

(DOCX)

S3 Таблица. Данные Giardia miR6 в образцах стула человека, результаты Ct в реальном времени и данные кривой ROC.

Расчет оптимального отсечения, определяемого как отсечение с наивысшим отношением правдоподобия [определяется как% чувствительности / (100% специфичность)].

https://doi.org/10.1371/journal.pntd.0007398.s006

(DOCX)

Ссылки

1. 1.
   Verweij JJ, Blange RA, Templeton K, Schinkel J, Brienen EA, van Rooyen MA и др.Одновременное обнаружение Entamoeba histolytica, Giardia lamblia и Cryptosporidium parvum в образцах фекалий с помощью мультиплексной ПЦР в реальном времени. J Clin Microbiol. 2004. 42 (3): 1220–3. Epub 2004/03/09. pmid: 15004079; PubMed Central PMCID: PMC356880.
2. 2.
   Носала К., Доусон СК. Критическая роль цитоскелета в патогенезе лямблий. Curr Clin Microbiol Rep. 2015; 2 (4): 155–62. Epub 2016/06/28. pmid: 27347476; PubMed Central PMCID: PMC4

   6.

3. 3.
   Колли С.М., Безаджио Р.К., Ниши Л., Биньотто Т.С., Феррейра Е.С., Фалавинья-Гильерме А.Л. и др.Идентичный набор Giardia duodenalis у людей, животных и овощей в городских районах на юге Бразилии указывает на связь между ними. PLoS ONE. 2015; 10 (3): e0118065. Epub 2015/03/12. pmid: 25761119; PubMed Central PMCID: PMC4356552.
4. 4.
   Сильвестри С., Греганти Дж., Арзени Д., Морчиано А., Кастелли П., Барчиеси Ф. и др. Кишечный паразитоз: анализ данных 2006–2011 гг. В клинической больнице Анконы, Италия. Infez Med. 2013; 21 (1): 34–9. Epub 2013/03/26. pmid: 23524899.
5. 5.
   Бен-Шимол С., Саги О., Гринберг Д. Различия в распространенности паразитов в образцах стула между тремя разными этническими педиатрическими популяциями на юге Израиля, 2007–2011 гг. Parasitol Int. 2014. 63 (2): 456–62. Epub 2013/11/10. pmid: 24201297.
6. 6.
   Ди Генова Б.М., Тонелли Р.Р. Стратегии заражения кишечными паразитическими патогенами и ответами клеток-хозяев. Front Microbiol. 2016; 7: 256. Epub 2016/03/15. pmid: 26973630; PubMed Central PMCID: PMC4776161.
7. 7.Ханевик К., Хаускен Т., Моркен М.Х., Стрэнд Э.А., Морч К., Колл П. и др. Сохраняющиеся симптомы и воспаление двенадцатиперстной кишки, связанные с инфекцией Giardia duodenalis. J Infect. 2007. 55 (6): 524–30. Epub 2007/10/30. pmid: 17964658.
8. 8.
   Nissan B, Lachish T, Schwartz E. Эффективность эмпирического антипаразитарного лечения у возвращающихся путешественников со стойкими абдоминальными симптомами. Журнал туристической медицины. 2018; 25 (1). Epub 2017/12/13. pmid: 29232458.
9. 9.
   Росс АГ, Криппс А.В.Энтеропатогены и хронические заболевания у возвращающихся путешественников. N Engl J Med. 2013; 369 (8): 784. Epub 2013/08/24. pmid: 23964949.
10. 10.
    Картрайт С.П. Полезность многократного анализа яиц стула и исследований на паразитов в условиях высокой распространенности. J Clin Microbiol. 1999. 37 (8): 2408–11. Epub 1999/07/16. pmid: 10405376; PubMed Central PMCID: PMC85240.
11. 11.
    Хэнсон К.Л., Картрайт С.П. Использование иммуноферментного анализа не устраняет необходимости анализировать несколько образцов стула для чувствительного обнаружения Giardia lamblia.J Clin Microbiol. 2001. 39 (2): 474–7. Epub 2001/02/07. pmid: 11158092; PubMed Central PMCID: PMC87761.
12. 12.
    Джонстон С.П., Баллард М.М., Бич М.Дж., Кузер Л., Уилкинс П.П. Оценка трех коммерческих тестов для обнаружения организмов Giardia и Cryptosporidium в образцах фекалий. J Clin Microbiol. 2003. 41 (2): 623–6. Epub 2003/02/08. pmid: 12574257; PubMed Central PMCID: PMC149727.
13. 13.
    Zboromyrska Y, Hurtado JC, Salvador P, Alvarez-Martinez MJ, Valls ME, Mas J, et al.Этиология диареи путешественников: оценка инструмента мультиплексной ПЦР для обнаружения различных энтеропатогенов. Клиническая микробиология и инфекции: официальное издание Европейского общества клинической микробиологии и инфекционных заболеваний. 2014; 20 (10): O753–9. Epub 2014/03/14. pmid: 24621195.
14. 14.
    Фуад С.А., Эсмат С., Басёни М.М., Фархан М.С., Кобаиси М.Х. Молекулярная идентификация кишечной лямблии у пациентов с диспепсией. Пищеварение. 2014; 90 (1): 63–71. Epub 2014/09/10.pmid: 25196096.
15. 15.
    Грациоли Б., Матера Дж., Ларатта С., Скипани Дж., Гуарньери Дж., Спиниелло Е. и др. Инфекция Giardia lamblia у пациентов с синдромом раздраженного кишечника и диспепсией: проспективное исследование. Мир Дж. Гастроэнтерол. 2006; 12 (12): 1941–4. Epub 2006/04/13. pmid: 16610003; PubMed Central PMCID: PMC4087522.
16. 16.
    Бушати Н, Коэн СМ. функции микроРНК. Ежегодный обзор клеточной биологии и биологии развития. 2007. 23: 175–205. pmid: 17506695.
17. 17.Сарайя А.А., Ли В., Ву Дж., Чанг СН, Ван СС. МикроРНК в древнем протисте подавляют экспрессию специфичного для варианта поверхностного белка, нацеливаясь на всю кодирующую последовательность. PLoS Pathog. 2014; 10 (2): e1003791. Epub 2014/03/04. pmid: 24586143; PubMed Central PMCID: PMC3937270.
18. 18.
    Liao JY, Guo YH, Zheng LL, Li Y, Xu WL, Zhang YC и др. И эндо-миРНК, и малая РНК, происходящая от тРНК, участвуют в дифференцировке примитивных эукариот Giardia lamblia. Proc Natl Acad Sci U S A.2014. 111 (39): 14159–64. pmid: 25225396; PubMed Central PMCID: PMC41

    .

19. 19.
    Ли В., Сарайя А.А., Ван СС. В регуляции генов Giardia lambia участвует предполагаемая микроРНК, происходящая из небольшой ядрышковой РНК. PLoS игнорирует тропические болезни. 2011; 5 (10): e1338. Epub 2011/10/27. pmid: 22028939; PubMed Central PMCID: PMC3196473.
20. 20.
    Гриффитс-Джонс С., Сайни Х. К., ван Донген С., Энрайт А. Дж. miRBase: инструменты для геномики микроРНК. Nucleic Acids Res. 2008; 36 (выпуск базы данных): D154–8.pmid: 179

.

21. 21.
    Ли SC, Чан WC, Ху LY, Lai CH, Hsu CN, Lin WC. Идентификация гомологичных микроРНК в геномах 56 животных. Геномика. 2010; 96 (1): 1–9. Epub 2010/03/30. pmid: 20347954.
22. 22.
    Чен Х, Ба И, Ма Л, Цай Х, Инь И, Ван К. и др. Характеристика микроРНК в сыворотке: новый класс биомаркеров для диагностики рака и других заболеваний. Клеточные исследования. 2008. 18 (10): 997–1006. Epub 2008/09/04. pmid: 18766170.
23. 23.
    Какимото Ю., Танака М., Камигучи Х., Очиай Э., Осава М.Стабильность микроРНК в образцах тканей FFPE: зависимость от содержания GC. PLoS ONE. 2016; 11 (9): e0163125. pmid: 27649415; PubMed Central PMCID: PMC5029930.
24. 24.
    Ссылка A, Балагер Ф., Шен Й., Нагасака Т., Лозано Дж. Дж., Боланд С. Р. и др. Фекальные микроРНК как новые биомаркеры для скрининга рака толстой кишки. Эпидемиология рака, биомаркеры и профилактика: публикация Американской ассоциации исследований рака, спонсируемая Американским обществом профилактической онкологии. 2010; 19 (7): 1766–74.Epub 2010/06/17. pmid: 20551304; PubMed Central PMCID: PMC20.
25. 25.
    Monis PT, Caccio SM, Thompson RC. Вариация в Giardia: к таксономической ревизии рода. Тенденции паразитологии. 2009. 25 (2): 93–100. pmid: 1

17.

26. 26.
    Keister DB. Аксеническая культура Giardia lamblia в среде TYI-S-33 с добавлением желчи. Труды Королевского общества тропической медицины и гигиены. 1983. 77 (4): 487–8. Epub 1983/01/01. pmid: 6636276.
27. 27.Шило В., Мор-Йосеф Леви I, Абель Р., Михайлович А., Вассерман Г., Навех-Мани Т. и др. Let-7 и MicroRNA-148 регулируют уровень паратироидного гормона при вторичном гиперпаратиреозе. J Am Soc Nephrol. 2017; 28 (8): 2353–63. pmid: 28298326; PubMed Central PMCID: PMC5533223.
28. 28.
    Qiu X, Zhang H, Yu H, Jiang T, Luo Y. Биоанализ, опосредованный дуплексной нуклеазой. Тенденции в биотехнологии. 2015; 33 (3): 180–8. pmid: 25640199.
29. 29.
    Фарази Т.А., Браун М., Морозов П., Тен Хув Дж.Дж., Бен-Дов И.З., Ховестадт В. и др.Биоинформатический анализ библиотек кДНК со штрих-кодом для профилирования малых РНК с помощью секвенирования следующего поколения. Методы. 2012. 58 (2): 171–87. pmid: 22836126; PubMed Central PMCID: PMC3597438.
30. 30.
    Friedlander MR, Mackowiak SD, Li N, Chen W., Rajewsky N. miRDeep2 точно идентифицирует известные и сотни новых генов микроРНК в семи кладах животных. Nucleic Acids Res. 2012; 40 (1): 37–52. pmid: 21

    5; PubMed Central PMCID: PMC3245920.

31. 31.
    Макрэ И.Дж., Чжоу К., Ли Ф., Репик А., Брукс А.Н., Канде В.З. и др.Структурная основа процессинга двухцепочечной РНК с помощью Dicer. Наука. 2006. 311 (5758): 195–8. pmid: 16410517.
32. 32.
    Чен XS, Коллинз Л.Дж., Биггс П.Дж., Пенни Д. Высокопроизводительный полногеномный обзор малых РНК паразитарных простейших Giardia Кишечник и Trichomonas vaginalis. Genome Biol Evol. 2009; 1: 165–75. pmid: 20333187; PubMed Central PMCID: PMC2817412.
33. 33.
    Хуанг П.Дж., Лин В.Ч., Чен С.К., Линь Ю.Х., Сан С.Х., Лю П.С. и др. Идентификация предполагаемых miRNA из одноклеточных жгутиконосцев с глубоким ветвлением.Геномика. 2012; 99 (2): 101–7. Epub 2011/11/29. pmid: 22120185.
34. 34.
    Ли В., Сарайя А.А., Ван СС. Профиль микроРНК, полученных из snoRNA, которые регулируют экспрессию вариантных поверхностных белков в Giardia lamblia. Клеточная микробиология. 2012. 14 (9): 1455–73. Epub 2012/05/10. pmid: 22568619; PubMed Central PMCID: PMC3422372.
35. 35.
    Сарайя А.А., Ли В., Ван СС. МикроРНК, полученная в результате очевидного канонического пути биогенеза, регулирует экспрессию гена вариантного поверхностного белка в Giardia lamblia.РНК. 2011. 17 (12): 2152–64. pmid: 22033329; PubMed Central PMCID: PMC3222128.
36. 36.
    Сарайя А.А., Ван СС. snoRNA, новый предшественник микроРНК в Giardia lamblia. PLoS Pathog. 2008; 4 (11): e1000224. Epub 2008/12/02. pmid: 159; PubMed Central PMCID: PMC2583053.
37. 37.
    Чжан Ю.К., Чен Д.Л., Тиан Х.Ф., Чжан Б.Х., Вэнь Дж.Ф. Полногеномная вычислительная идентификация микроРНК и их мишеней в глубоко ветвящихся эукариотах Giardia lamblia. Comput Biol Chem.2009. 33 (5): 391–6. pmid: 19716768.
38. 38.
    Менингер Т., Лерман Г., Регев-Рудски Н., Голд Д., Бен-Дов И.З., Сиди Ю. и др. Шистосомные микроРНК, выделенные из внеклеточных пузырьков в сыворотке инфицированных пациентов: новый инструмент для диагностики и наблюдения за шистосомозом человека. J Infect Dis. 2017; 215 (3): 378–86. pmid: 28362903.
39. 39.
    Ян Дж., Чжан Н., Ци С., Лю X, Шангуань Д. Одношаговая ОТ-ПЦР в реальном времени для обнаружения микроРНК. Таланта. 2013; 110: 190–5. Epub 2013/04/27.pmid: 23618193.
40. 40.
    Chen C, Ridzon DA, Broomer AJ, Zhou Z, Lee DH, Nguyen JT и др. Количественное определение микроРНК в режиме реального времени с помощью ОТ-ПЦР «стержень-петля». Nucleic Acids Res. 2005; 33 (20): e179. Epub 2005/11/30. pmid: 16314309; PubMed Central PMCID: PMC1292995.
41. 41.
    Хаджиан-Тилаки К. Анализ кривой рабочих характеристик приемника (ROC) для оценки медицинских диагностических тестов. Каспийский журнал внутренней медицины. 2013. 4 (2): 627–35. pmid: 24009950; PubMed Central PMCID: PMC3755824.
42. 42.
    Оберхубер G, Stolte M. Лямблиоз: анализ гистологических изменений в биоптатах 80 пациентов. J Clin Pathol. 1990. 43 (8): 641–3. Epub 1990/08/01. pmid: 2401732; PubMed Central PMCID: PMC502644.
43. 43.
    Зафар М.Н., Бакай Р., Лоди Т.З., Ахмад С., Ахмед В., Куреши Н. и др. Giardia lamblia у пациентов, перенесших верхнюю G.I. эндоскопия. J Pak Med Assoc. 1991. 41 (4): 74–5. Epub 1991/04/01. pmid: 1861341.
44. 44.
    Гупта С.К., Кроффи Дж. М., Пфефферкорн, доктор медицины, Фицджеральд Дж. Ф.Диагностическая ценность дуоденального аспирата на G. lamblia и сравнение с биопсией слизистой оболочки двенадцатиперстной кишки. Dig Dis Sci. 2003. 48 (3): 605–7. Epub 2003/05/22. pmid: 12757177.
45. 45.
    Якуб Дж., Джафри В., Абид С., Джафри Н., Хамид С., Шах Х.А. и др. Лямблиоз у больных с диспепсическими симптомами. Мир Дж. Гастроэнтерол. 2005. 11 (42): 6667–70. Epub 2006/01/21. pmid: 16425362; PubMed Central PMCID: PMC4355762.

Распространенность и факторы риска инфекции Giardia duodenalis среди детей: тематическое исследование в Португалии | Паразиты и переносчики

Научные публикации — Паразиты — Giardia lamblia

чт, 30.09.2021 — 08:02

от Валида Эльмонира, Хайтам Элаадли, Анана Амера, Хаммеда Эль-Шаркави, Мохамеда Бессата, Сами Ф.Махмуд, Мустафа Шукри Атта, Ваэль Ф. Эль-Трас Кишечные паразитарные инфекции (ИПИ) относятся к числу основных проблем общественного здравоохранения во всем мире, особенно в развивающихся странах, таких как Египет. Это исследование было направлено на оценку распространенности и факторов риска, связанных с ИПИ среди детей дошкольного и школьного возраста в Египте …

чт, 16.09.2021 — 06:15

Автор (ы): Руана С. Амарал, Джойс Ф. Фрейтас, Майана Р.С. Рибейро, Дениз К. Кара Мачадо, Фернанда Ф.Роча, Марсия К.А. Тейшейра, Вальберт Н. Кардозу, Мария Э. Р. Андраде, Сезар А. Вилела Силва, Марсело В. Калиари, Мария А. Гомес Нашей целью было оценить влияние иммуносупрессии на развитие лямблиоза. Тридцать шесть песчанок (возрастом 4–6 недель) были распределены в четыре группы по …

вт, 14.09.2021 — 03:09

Введение. Идентификация энтеропатогенов имеет решающее значение для клинического ведения пациентов с подозрением на желудочно-кишечную инфекцию.Система мультиплексной ПЦР FLOW (FMPS) представляет собой полуавтоматическую платформу (FLOW System, Roche) для анализа мультиплексной ПЦР в реальном времени. Гипотеза / Заявление о пробеле. FMPS имеет большую чувствительность для обнаружения кишечных патогенов, чем стандартные методы, такие как …

сб, 31.07.2021 — 02:02

Имеется немного данных о генетической идентичности кишечных простейших Cryptosporidium spp., Giardia duodenalis и Enterocytozoon bieneusi у людей в Таиланде.В этом исследовании было взято 254 образца стула у детей младшего школьного возраста из провинции Ратчабури на границе Таиланда и Мьянмы и исследовано на наличие Cryptosporidium spp., G. duodenalis, E. bieneusi и Cyclospora cayetanensis с помощью ПЦР …

сб, 12.06.2021 — 00:00

Лямблиоз — это серьезное диарейное заболевание, от которого ежегодно страдают около 2,5 миллионов детей в развивающихся странах. В нескольких исследованиях сообщалось об устойчивости Giardia lamblia (G.lamblia) к нескольким препаратам. Поэтому определение эффективного препарата от лямблиоза является необходимостью. В этом исследовании изучали противопаразитарный эффект Punica granatum (гранат) и оценивали его терапевтический …

чт, 22.04.2021 — 00:00

Лямблиоз — кишечное протозойное заболевание, вызываемое Giardia lamblia. Заболевание стало глобальной проблемой здравоохранения из-за развития устойчивости к широко используемым лекарствам. Поскольку многие продукты растительного происхождения использовались для лечения многих паразитарных инвазий, мы стремились оценить терапевтическую ценность Artemisia annua (A.annua) при лямблиозе. Мы показали, что продукция NO была значительно …

вт, 02.03.2021 — 02:03

Cryptosporidium — важный кишечный простейший паразит, вызывающий диарею у людей и животных. Для быстрого и точного обнаружения Cryptosporidium spp. Мы разработали пару праймеров на основе гена малой субъединицы рибосомной РНК (SSU рРНК) Cryptosporidium spp. для использования в новом анализе ПЦР с использованием наночастиц (нано-ПЦР).Минимальная обнаруживаемая концентрация (1,02 пг) этого нано -…

сб, 27.02.2021 — 10:03

Giardia duodenalis (синоним Giardia lamblia, Giardia Кишечник) является возбудителем лямблиоза, одной из наиболее распространенных диарейных инфекций у людей. Эволюционные отношения между генотипами (или подтипами) G. duodenalis группы B, одной из двух генетических групп, вызывающих большинство инфекций человека, остаются неясными из-за плохого филогенетического разрешения существующих методов типирования.В …

пн, 22.02.2021 — 16:00

Эпителий тонкой кишки является основным путем заражения многих простейших паразитов. Однако понимание механизмов заражения затруднено из-за отсутствия подходящих моделей, отражающих сложность кишечного эпителия. Здесь мы описываем платформу in vitro с использованием кишечных органоидов из стволовых клеток, установленную для четырех важных видов…

пт, 02.05.2021 — 04:02

Лямблиоз — это запущенное паразитарное диарейное заболевание, которое особенно ассоциируется с бедностью. Текущие варианты лечения ограничены перед лицом растущей устойчивости, но уменьшенный кином Giardia lamblia увеличивает вероятность выявления неизбыточных эссенциальных киназ в качестве потенциальных мишеней для лекарств. Повторное использование известных и недавно идентифицированных ингибиторов киназ в программах разработки лекарств…

пт, 29.01.2021 — 02:04

Лямблии включают один род с несколькими морфологически разными видами, описанными у млекопитающих (включая людей, сумчатых, грызунов), птиц и земноводных. Эта группа простейших провоцирует диарею у людей и животных во всем мире. Передача паразита происходит фекально-оральным путем. Что касается присутствия лямблий у беспозвоночных, некоторые работы показали, что мухи могут…

пт, 18.12.2020 — 16:00

Giardia lamblia — важный возбудитель стойкой диареи у людей, домашних животных и крупного рогатого скота. Фундаментальные исследования обычно проводятся со штаммом WBC6 и включают генетические манипуляции, такие как трансфекции. Здесь мы исследуем, как трансфекция плазмидой, вызывающая стабильную экспрессию чужеродного гена, влияет на весь протеомный паттерн. Используя дробовик масс-спектрометрии, мы…

чт, 10.12.2020 — 22:07

Цели. Целью данного исследования было оценить эффект лечения пробиотиком Saccharomyces boulardii с метронидазолом или без него при экспериментальном лямблиозе. Методы и результаты Влияние лечения S. boulardii с метронидазолом или без него на слизистую оболочку кишечника, систему антиоксидантной защиты и паразитарную нагрузку определяли при экспериментальном лямблиозе. Восемь…

ср, 25.11.2020 — 16:00

Cryptosporidium и Giardia — два важных зоонозных кишечных простейших, ответственных за диарейные заболевания у людей и животных во всем мире. Фекалии инфицированных хозяев, вода и продукты питания, загрязненные ооцистами Cryptosporidium и цистами лямблий, а также такие предикторы, как бедность, были вовлечены в их передачу. Мьянма — одна из самых бедных стран мира. На сегодняшний день нет…

чт, 22.10.2020 — 16:00

Giardia lamblia — кишечные простейшие, разделенные на восемь групп, обозначенных в алфавитном порядке от A до H. Группы A, B и E инфицируют людей и могут иметь симпатрическое кровообращение. Мы исследовали рециркуляцию скоплений у детей, живущих в зоне высокой распространенности инфекции Giardia. Сто девяносто четыре ребенка были обследованы, и 85 дали положительный результат на лямблии с помощью ПЦР…

вт, 22.09.2020 — 10:02

Лямблиоз, вызываемый кишечным паразитом Giardia lamblia, является тяжелым диарейным заболеванием, эндемичным в бедных регионах мира, а также распространенной инфекцией в развитых странах. Доступные терапевтические варианты связаны с побочными эффектами, а устойчивость G. lamblia к стандартным лекарствам распространяется. Фумагиллин, противомикроспоридиозный препарат, является лечебным…

сб, 15.08.2020 — 12:00

Предпосылки Инфекция Campylobacter связана с задержкой роста детей даже при отсутствии симптомов. Чтобы изучить основные механизмы, мы оценили связь между инфекцией Campylobacter, линейным ростом и особенностями фекального микробного сообщества в когорте предполагаемых рождений из 271 ребенка с высоким бременем диареи и задержкой роста в Амазонских низинах в Перу. Методы…

ср, 07/08/2020 — 02:03

Кишечные паразитарные инфекции (ИПИ) могут представлять серьезную угрозу для пациентов с ослабленным иммунитетом. Это особенно актуально для тех, кто проходит химиотерапию и гемодиализ. Настоящее исследование направлено на выявление кишечных паразитов, которые могут присутствовать у пациентов с ослабленным иммунитетом. В этом поперечном исследовании было собрано 1040 образцов стула с марта по сентябрь 2017 года. Шестьсот и…

пн, 29.06.2020 — 22:13

Цели Giardia lamblia — простейшие паразиты, вызывающие лямблиоз, одно из самых распространенных желудочно-кишечных заболеваний во всем мире. Для рациональной разработки вакцины против лямблий решающее значение имеет углубление нашего понимания взаимодействия хозяина и лямблий. В этом исследовании мы проанализировали иммуногенность и антигенность двух вариантов штамма G. lamblia [GS и GS-5G8 (+)], которые экспрессируют разные уровни…

чт, 21.05.2020 — 03:43

Чтобы идентифицировать свободноживущие амебы (FLA) и устойчивые к амебе бактерии (ARB), накопленные в мидиях данио и в воде, в которой они обитают, мидии были собраны в двух местах в бассейне реки Эбро (северо-восток Испании). Свободноживущие амебы и бактерии были выделены из экстрактов мидий и из природной воды. Методы ПЦР использовались для идентификации бактерий FLA и эндосимбионтов (…

вт, 25.02.2020 — 03:42

Ленка Черникова, Кармен Фасо, Адриан Б. Хель Фосфорилированные производные фосфатидилинозита (PIP) являются ключевыми липидными остатками мембран, участвующих в клатрин-опосредованном эндоцитозе (CME). CME полагается на PI (4,5) P2, чтобы маркировать эндоцитарные участки на плазматической мембране (PM), связанные с образованием везикул, покрытых клатрином (CCV). Сильно разветвленные паразитические простейшие Giardia lamblia представлены неупорядоченными и…

сб, 22.02.2020 — 03:34

Автор (ы): Д. Костопулу, Э. Кларебу, Д. Арванитис, П. Лигда, С. Казаерт, С. Сотираки Аннотация Исследование было проведено в двух разных районах Греции с целью изучения наличия кишечных паразитарных инфекций у человека (нацелено на здоровых людей). и люди с диареей). Всего было взято 876 проб стула у 822 взрослых и 54 детей. Как осаждение (кислота / эфир), так и концентрирование /…

вт, 18.02.2020 — 03:29

Высокая распространенность Cryptosporidium и Giardia была недавно обнаружена у пациентов с кишечным заболеванием в районе Кикиктаалук в Нунавуте, Канада, при подозрении на паразиты пищевого, водного или животного происхождения. Моллюски (Mya truncata) — это широко потребляемая, культурно важная и питательная деревенская еда в Икалуите; однако моллюски могут концентрировать патогенные простейшие из загрязненных вод…

пт, 02.07.2020 — 03:51

Bertiella sp. является типичным паразитом у приматов, кроме человека, и только несколько случаев бертиеллеза были зарегистрированы у людей. Мы представляем новый случай бертиеллеза у 42-летней женщины, ухаживающей за обезьянами-ревунами в реабилитационном центре дикой природы в Аргентине. Bertiella sp. инфекция была также диагностирована у обезьян. Проглоттиды и фекалии собирали у смотрителя и обезьян; файл…

чт, 30.01.2020 — 03:36

Патогенные микроорганизмы используют различные механизмы для сохранения энергии в тканях хозяина и резервуарах окружающей среды. Одним из широко распространенных, но часто упускаемых из виду средств энергосбережения является потребление или производство молекулярного водорода (h3). Здесь мы всесторонне рассматриваем распределение, биохимию и физиологию метаболизма h3 у патогенов. Переносят более 200 патогенов и патобионтов…

чт, 30.01.2020 — 03:31

Автор (ы): Панайота Лигда, Эдвин Кларебаут, Стейн Казаерт, Люси Дж. Робертсон, Смарагда СотиракиAbstract Морские двустворчатые моллюски обычно выращиваются в мелководных устьевых водах с высокой концентрацией питательных веществ. Многие микрозагрязнители, включая простейших паразитов Giardia duodenalis и Cryptosporidium spp., Которые также встречаются в таких средах, могут концентрироваться в моллюсках…

сб, 18.01.2020 — 03:32

Автор (ы): Франческа Коппола, Микела Маэстрини, Федерика Беррилли, Изабель Гуадано Прочези, Антонио Феличиоли, Стефания Перруччи Аннотация Италия — единственная европейская страна, где обитает хохлатый дикобраз (Hystrix cristata). На образцах фекалий было проведено паразитологическое исследование, направленное на оценку лямблий и других паразитов в популяции хохлатых дикобразов в Центральной Италии…

ср, 15.01.2020 — 03:24

Trichomonas vaginalis — паразитические простейшие, обитающие в урогенитальном тракте человека, вызывающие трихомониаз, которое является ведущим невирусным заболеванием, передаваемым половым путем. Он имеет космополитическое распространение по всему миру и затрагивает как мужчин, так и женщин. Жизненный цикл паразита традиционно описывается как состоящий из подвижных и вызывающих симптомы трофозоитов. Химический и температурный…

вс, 12.08.2019 — 03:54

Автор (ы): Кэтрин Т. Дункан, Николь Р. Кунс, Мариса А. Литерленд, Сьюзен Э. Литтл, Йоко НагамориАннотация Домашние собаки обычно являются источником кишечных паразитов в Оклахоме и во всем мире. Мы протестировали образцы фекалий из собачьих парков, чтобы определить распространенность кишечных паразитов, и сообщили об использовании средств борьбы с паразитами у собак, посещающих парк, и оценили потенциальные риски для здоровья, связанные с фекалиями…

ср, 12.04.2019 — 03:33

Автор (ы): Йоко Нагамори, Марк Э. Пэйтон, Эмили Лупер, Хэдли Эппл, Эйлин М. ДжонсонАннотацияВладельцы домашних кошек в Северной Америке постоянно растут; однако проведено лишь несколько исследований распространенности паразитизма у принадлежащих клиентам кошек за последние годы. Целью нашего исследования было оценить распространенность паразитов путем статистического анализа результатов исследования кала для…

сб, 19.10.2019 — 03:43

Giardia lamblia обычно культивируют аксенически в TYI-S-33, сложной среде, которая не позволяет выживать и расти клеткам млекопитающих. Точно так же среда, обычно используемая для поддержания и роста клеток млекопитающих, не поддерживает выживание здоровых трофозоитов более нескольких часов. Невозможность совместного культивирования трофозоитов и эпителиальных клеток в оптимальных условиях ограничивает исследования их …

чт, 17.10.2019 — 03:32

Эта работа оценила риск простейших в 10 школьных ресторанах в Армении (Киндио, Колумбия) путем анализа присутствия ДНК Cryptosporidium spp, Giardia duodenalis, Blastocystis и Cyclospora cayetanensis в пище, воде, а также в жилых и инертных поверхностях школьных ресторанов. и в табурете детей, которые ели в этих ресторанах.Из 213 проб продуктов питания, воды и поверхности 6,6% были …

сб, 14.09.2019 — 03:35

Автор (ы): Люси Дж. Робертсон, К. Грэм Кларк, Джон Дж. Дебенхэм, Джей Пи Дуби, Мартин Квач, Джунцян Ли, Франсиско Понсе-Гордо, Уна Райан, Гереон Шарес, Чунлей Су, Анастасиос Д. Цаусис Аннотация Возникающие инфекционные заболевания часто бывают зоонозными, часто происходят из дикой природы, но кишечные простейшие считаются относительно незначительными участниками.Мнения о том, являются ли кишечные патогены …

сб, 14.09.2019 — 03:34

Автор (ы): Мэтью М. Хичкок, Кэтрин А. Хоган, Индре Будвитене, Ниаз Банаи Резюме Несмотря на то, что панель FilmArray GI Panel имеет совокупную специфичность и воспроизводимость> 97% и> 99%, соответственно, воспроизводимость менее понятна в клинических условиях. упражняться. Мы измерили воспроизводимость положительных результатов для патогенов с низкой распространенностью.Образцы с положительными результатами на …

сб, 14.09.2019 — 03:33

Автор (ы): Катарина Лихтманнспергер, Барбара Хинни, Аня Йоахим, Томас Виттек Резюме Чтобы получить информацию о встречаемости и распределении генотипов G. кишечника и C. parvum у австрийского крупного рогатого скота, образцы фекалий диарейных телят моложе 180 дней, происходящих из Было обследовано 70 хозяйств. Из 177 проб фекалий 27,1% были положительными на цисты лямблий (…

вс, 11.08.2019 — 01:04

Доступно онлайн с 9 августа 2019 г. Автор (ы): Цзюньцян Ли, Ке Ши, Фангфанг Сун, Тингвен Ли, Ронгджун Ван, Сумей Чжан, Фучунь Цзянь, Чаншен ​​Нин, Лунсянь Чжан Абстракт известные этиологические агенты самоограничивающейся диареи, хронических расстройств и тяжелых изнурительных заболеваний у людей, в частности…

ср, 24.07.2019 — 01:07

Дата публикации: Доступно в Интернете 23 июля 2019 г. Источник: Анализ микробных рисков Автор (ы): Урсула Гонсалес-Баррон, Энн Тебо, Полин Ко, Лоуренс Ватье, Моэс Санаа, Васко Кадавес Аннотация Для разработки эффективных стратегий общественного здравоохранения и, в частности, эффективных меры по обеспечению безопасности пищевых продуктов для снижения бремени болезней пищевого происхождения, наиболее важных источников кишечных заболеваний…

вт, 23.07.2019 — 20:00

Giardia lamblia, одноклеточный эукариот, колонизирует и процветает в тонком кишечнике человека. Из-за своего компактного и редуцированного генома лямблии адаптировали «минималистичный» образ жизни, так как они становятся зависимыми от доступных ресурсов тонкой кишки. Поскольку лямблии экспрессируют меньше генов сфинголипидов (SL), а гликосфинголипиды имеют решающее значение для инцистации, мы исследовали SL…

чт, 18.07.2019 — 13:19

Аннотация

Цели
Целью этого исследования было оценить пробиотический потенциал подлинных штаммов Bifidobacterium longum 51A и Weissella Paramesenteroides WpK4 при экспериментальном лямблиозе.

Методы и результаты
Бактерии вводили перорально песчанкам (Meriones unguiculatus) за 10 дней до орального заражения трофозоитами Giardia lamblia. Через 7 дней заражения животные…

чт, 27.06.2019 — 01:14

Доступно онлайн 24 июня 2019 г. Автор (ы): Карен Шапиро, Минджи Ким, Вероника Б. Раджал, Майкл Дж. Арровуд, Андреа Пакхэм, Беатрис Агилар, Стефан ВюртцАннотация Загрязнение свежих продуктов патогенами представляет опасность для здоровья потребителей; тем не менее, в овощеводстве по-прежнему отсутствуют адекватные инструменты для одновременного обнаружения простейших паразитов. Здесь был анализ простой мультиплексной ПЦР (mPCR)…

вт, 21.05.2019 — 11:00

Giardia lamblia, одна из наиболее распространенных протозойных инфекций кишечника человека, является важной причиной во всем мире диарейных заболеваний, мальабсорбции, недоедания, задержки когнитивного развития у детей и длительных постинфекционных синдромов. Несмотря на медицинское значение, вакцины против лямблиоза для человека не существует. Разработана и экспериментальная ветеринарная вакцина…

вс, 17.03.2019 — 01:12

Доступно онлайн 16 марта 2019 г. Автор (ы): Панайота Лигда, Эдвин Кларебаут, Люси Дж. Робертсон, Смарагда Сотираки Аннотация Морские двустворчатые моллюски представляют интерес для общественного здравоохранения, поскольку они могут накапливать загрязняющие вещества в своих тканях. Поскольку их обычно употребляют в сыром или слегка приготовленном виде, они считаются возможным источником инфекций пищевого происхождения, включая лямблиоз и криптоспоридиоз….

пн, 11.03.2019 — 17:00

Цзы-Ци Линь, Су-Ва Ган, Су-Ю Тунг, Чун-Че Хо, Ли-Син Су, Чин-Хун Сун

Giardia lamblia превращается в спящую дифференцировку в водостойкую кисту, которая может заразить нового хозяина. Синтез трех белков стенки кисты (CWP) является фундаментальной особенностью этой дифференцировки. Белки фактора миелоидного лейкоза (MLF) участвуют в дифференцировке клеток и туморогенезе у млекопитающих, но мало…

пт, 07.06.2018 — 01:13

Дата публикации: ноябрь 2018, Том 93 Автор (ы): Радка Дзедзинская, Моника Моравкова, Якуб Грды, Ива Слана, Хана Влкова, Хана Кунстовна, Петра Васицкова Соки и смузи AbstractFresh в настоящее время пользуются большой популярностью у потребителей. Однако данные о микробиологической безопасности этих продуктов, продаваемых населению в точках питания, либо очень ограничены, либо отсутствуют …

чт, 05.03.2018 — 10:24

Дата публикации: Доступно онлайн 2 мая 2018 г. Автор (ы): Адриана Кальдераро, Моника Мартинелли, Мирко Буттрини, Сара Монтеккини, Сильвия Кован, Сабина Росси, Франческа Ферралья, Паоло Монтанья, Федерика Пинарди, Сандра Ларини, Мария Кристина Арканджелетти, Мария Кристина Медичи, Карло Чецци, Флора Де Конто Это исследование представляет собой двухлетнюю картину эпидемиологии…

сб, 25.11.2017 — 06:22

Дата публикации: декабрь 2017 г., том 100, выпуск 12 Автор (ы): Кэтрин Дж. Бур, Мартин Видманн, Сара Мерфи, Сэм Алкаин Микробы, которые могут присутствовать в молоке, могут включать патогены, организмы, вызывающие порчу, организмы, которые могут быть условно полезными. (например, молочнокислые бактерии), а также те, которые не связаны ни с положительным, ни с пагубным воздействием на качество продукции или…

пт, 10.06.2017 — 15:27

Дата публикации: 18 декабря 2017 г., Том 263 Автор (ы): Кьерсти Селстад Утаакер, Анил Кумар, Химаншу Джоши, Суман Чаудхари, Люси Дж. Робертсон Свежие продукты признаны переносчиком инфекции простейших паразитов, в частности Cryptosporidium, и , в меньшей степени, лямблии. Для обоих паразитов были зарегистрированы вспышки, связанные со свежими продуктами ….

вс, 20.08.2017 — 07:30

Аннотация
Цели Оценить риск диарейных заболеваний, вызванных энтеропатогенными E. coli, Giardia и Cryptosporidium в результате употребления сырого шпината, капусты, моркови и помидоров в долине Катманду, Непал.
Методы и результаты Годовой риск заражения был определен количественно с использованием метода вероятностной количественной оценки микробного риска, который учитывал 12 комбинаций мытья овощей. Привыкла новая модель…

чт, 27.07.2017 — 17:00

Лютер А. Бартельт, Дэвид Т. Болик, Хорди Майнерис-Перксакс, Глинис Л. Коллинг, Грегори Л. Медлок, Эдна И. Заенкер, Джеффри Доновиц, Роуз Вигуна Томас-Беккет, Эллисон Рогала, Ян М. Кэрролл, Стивен М. . Певец, Джейсон Папен, Джонатан Р. Суонн, Ричард Л. Геррант.

Различное воздействие энтеропатогенов связано с детским недоеданием. Для выяснения механизмов распространения микробов…

вт, 13.06.2017 — 19:49

Дата публикации: октябрь 2017 г., том 67 Автор (ы): Тициана Карадонна, Марианна Маранги, Федерика Дель Кьерико, Никола Феррари, София Реддел, Джорджия Бракалья, Джованни Норманно, Лоренца Путиньяни, Аннунциата Джангасперо Изучить распространенность заражения Джангасперо. duodenalis, Cryptosporidium spp., Toxoplasma gondii и Cyclospora cayetanensis, in ‘…

.