Евгения семина: Евгения Семина (Москва) — тренер — отзывы, контакты, расписание тренингов — Все Тренинги .ру

Евгения Семина ВКонтакте, Казань, Россия, id18125758

Школа футбольного IQ
Школа Футбольного IQ

Уникальная методология с акцентом на:

1. Специальную технику
2. Правильную моторику
3. Футбольный интеллект
Тренера А-UEFA

Сарказм
Не пытайся.

Дом Кулинарии • Золотые Рецепты
Кулинарные рецепты для приготовления блюд. Все самое вкусное!

Прически | Стрижки 💇 Окрашивания
😌 Прически | Стрижки 💇 Окрашивания:

— научим любой прическе, независимо от длины волос;
— вдохновим на новое окрашивание;
— расскажем, как избавиться от секущихся кончиков и выпадения.

Волосы, как у Рапунцель. 👌🏻 Не меньше! 😇 Хочешь такие? Присоединяйся!

Уютный уголок
Добро, любовь и поболтать 😉

Ждем ваши вопросы и интересные истории!
Жмите снизу «предложить новость» 👇

Размещаем анонимно 🤐

Селфи Волгоград
Добавляйте в предложенные новости свою!:)

Cookpad Рецепты
Cookpad (читается – “Кукпад”) – самое крупное кулинарное сообщество в мире. Десятки миллионов людей ежедневно готовят по рецептам авторов Cookpad. Автором рецептов может стать каждый!

Наш девиз — ежедневная готовка в радость!

Лучшие подборки рецептов вы найдете здесь 👉👉👉 https://cookpad-russia.ru/expertise

ВЯЗАНИЕ
Сообщество творческий людей и идей. Публикуем модели и узоры. Записываем для Вас бесплатные мастер классы по вязанию.

● С нами душевно ● Женская психология и мудрость

MultHD720 — любимые мультфильмы и мультсериалы
Качество мультфильмов: #HD720
Количество мультфильмов: +1 780
Участников в группе вк: больше +3000
Главный администратор группы: #IAM

FITNESS спорт мотивация
Для тех кто любит спорт, фитнес, здоровый образ жизни, мотивацию, вдохновение, отличные фигуры, красивые тела, чей интерес — стремление к лучшему!😉

AdMe.ru
AdMe.ru — создан людьми, искренне увлеченными миром творчества. Присоединяйтесь!

Лучшие рецепты Повара

Киномания — Лучшие фильмы
В сообществе размещаются подборки лучших фильмов, обзоры сериалов, а так-же последние новости из киноиндустрии

I ♡ ART
I ❤ ART — это сообщество для настоящих ценителей прекрасного. Первый и лучший паблик в контакте об искусстве и для искусства.

Арт, art, искусство, творчество, вдохновение, фотография, кино, граффити,
картины, рисунки, реклама, креатив, дизайн, музыка, тату, архитектура, арт хаус, фотошоп

Умный дом. Полезные советы!

Зачеркни прошлое
• Максимум смысла, любви, позитива.
• Всегда актуальные и жизненные темы.
• Наслаждайтесь, созерцайте, участвуйте.

Мир Discovery
🌿 Самый большой и душевный паблик о животных, людях и путешествиях
⛔ Мат в комментах удаляет спам-бот

Вдохновение.
— Вдохновение во всех проявлениях
— интересные новости и старости в путешествиях и бытовой жизни!

Искусство реальности

Евгения Сёмина (Москва, Санкт-Петербург) — тренер — отзывы, контакты, расписание тренингов — Самопознание.ру

• Трансперсональный терапевт (основной метод — дыхательные практики).
• Энерготерапевт (целительская работа).

С какими задачами работает:

• Работа со страхами и яростью.
• Эмоциональное равновесие.
• Жизненное благополучие: финансы, отношения, знание себя и своей реализации.
• Работа со стрессом.
• Личная эффективность и продуктивность.
• Уровень энергии и удовлетворённости жизнью.

Групповые занятия, индивидуальная работа, работа по скайпу.

Принцип работы

Всё очень просто — весь наш дисбаланс и неудовлетворённость лежат в пределах треугольника «Тело — Ум — Эмоции».

Работая с одной из этих составляющих мы улучшаем всю систему.

Евгения успешно работает с телом и эмоциями и просветление в уме, осознания, инсайты и освобождение происходит как следствие, само собой).

Опыт

Евгения много лет работает в трёх направлениях-она практикующий трансперсональный терапевт, топ-руководитель в одной из столичных компаний, а также учредитель тренинговой компании «Мастерская руководителя». Её богатый жизненный опыт и собственный успех позволяет помогать людям решать практически любые задачи.

Скопировано с сайта «Самопознание .ру»

Евгения Сёмина — оценки и отзывы

свернуть ↑

Итоговая оценка

Реутов | Хозяйка кафе Kitchen Евгения Сёмина — о новых ограничениях

С 28 июня 2021 года в Московской области посещать заведения общественного питания могут только лица, имеющие защиту от заболевания в виде вакцинации или переболевшие сovid-19 в течение последних шести месяцев. Наличие «защиты от коронавируса» можно подтвердить соответствующим сертификатом с QR-кодом. Рестораны и кафе обязаны проверять наличие QR-кодов у каждого клиента. «ПроРеутов» пообщался с хозяйкой реутовского кафе Kitchen Евгенией Сёминой, чтобы узнать, как организация планирует существовать в новых условиях.

— Наверняка всем представителям вашей отрасли было непросто в прошлом году. Какие действия кафе Kitchen предприняло тогда?

— Когда пандемия началась, мы работали только на вынос и доставку. До этого собственной доставки у нас не было. Мы оперативно, буквально за две ночи, сделали сайт и начали принимать заказы. Последние свободные средства направили на рекламу и анонс этого нового для нас направления. Тогда мы выживали только благодаря доставке. После того как кафе открылось, направление осталось активным. Наши клиенты до сих пор заказывают доставку. В нашем распоряжении имеется специальное оборудование, весь нужный транспорт. Поэтому к нынешней ситуации мы готовы чуть лучше, чем год назад.

— А новые ограничения? Появился ряд изменений по сравнению с прошлым годом…

— Есть опасения, что сейчас будет сложнее, чем в прошлом году. Когда был локдаун, мы могли сократить расходы. Арендодатель понимал, в какой ситуации мы оказались, и предоставил более выгодные условия по аренде. Сейчас нас формально не закрыли. Поводов идти нам навстречу ни у арендодателя, ни у поставщиков нет. Мы обязаны не только содержать зал в таком же виде, как и прежде, но ещё и бороться за каждого гостя, потому что счастливые обладатели QR-кодов могут выбирать любые заведения Москвы. То есть расходы мы не сократим, а посещаемость наверняка упадёт критически. Тридцать процентов нашей выручки — банкеты и праздники. Проводить их мы теперь не можем. Даже если заказчики привиты, гости могут не иметь вакцинирования, и мы практически не сможем устраивать банкетов. Надеюсь, эта история не продлится долго и мы как-то это переживём. Обсудили с персоналом режим жёсткой экономии во всём, сократили рабочие смены. Сотрудники нашего кафе — это люди, которые прошли первую пандемию со мной и имеют опыт выживания в подобной ситуации. Они доверяют мне, а я им, поэтому о сокращении штата речи не идёт.

— Расскажите, как прошёл первый день после введения правила обслуживания клиентов по QR-кодам.

—  Мы столкнулись с несколькими неприятными ситуациями. Вынуждены были отказать беременной девушке, у которой на руках был бумажный тест ПЦР. Ставить прививку в её положении нельзя, поэтому QR-кода у неё не было. Кроме того, мы вынуждены были вернуть предоплату за большую часть банкетов. К счастью, гости относятся с пониманием к тому, что происходит, и не имеют никакого негатива по отношению к кафе. Они знают, как туго нам приходится, поддерживают и сочувствуют. Нам действительно сейчас непросто, когда ты работаешь в сфере услуг, ты борешься за каждого клиента, а тут мы прямо на пороге отказываем людям. Это деморализует.

—  Как изменилась посещаемость?

— Капитально упала. Обычно тридцать процентов выручки — это банкеты, пятьдесят процентов — посадка в зале, а доставкой мы сделаем не больше двадцати процентов нашей выручки. Даже если постепенно количество посетителей с кодами увеличится, то это будет всего процентов двадцать-тридцать от того, что мы обычно имеем в сезон. Это падение до уровня выживания.

— Как сотрудники отреагировали на новые правила? Всем нужно прививаться…

— Реакция менялась буквально на глазах. Если в первый день все вставали в позу и говорили, что не хотят прививаться, то затем настроение сменилось, и сотрудники стали искать возможность побыстрее получить вакцину. У нас работают несколько иностранцев, им записаться и попасть на прививку сложнее. Мы обратились в администрацию городского округа за поддержкой, и на этой неделе их вакцинируют. Остальные ребята уже сходили и привились самостоятельно. Сейчас у нас нет ни одного сотрудника, который был бы категорически против происходящего. Это люди, которые не первый год работают в общепите, и они понимают, что ты обязан проходить определённые медицинские процедуры, чтобы тебя допустили к работе. В нашем деле это норма. Мы получаем медкнижки, каждые полгода проходим медосмотр, ставим другие необходимые прививки, сдаём анализы. Так что протеста нет.

— А почему отношение изменилось так резко? Помогла профилактическая беседа, люди осознали серьёзность ситуации?

— Естественно, я очень плотно общалась с сотрудниками. Наверняка поэтому кто-то поменял свою позицию. К тому же в первую волну пандемии мы ездили в ковидные больницы — кормили врачей. Так что все видели, как тяжело и страшно болеть сovid-19. Есть ещё момент: когда людей обязывали прививаться как сотрудников, это была одна история. Сейчас они осознали себя в качестве простых жителей страны, которые лишаются определённых возможностей. Рано или поздно всё равно придётся привиться.

Владислав Гуров

Автор: Владислав Гуров

Детское питание: как устроены семейные рестораны

🕓 время чтения: 9 мин.

«Семейный ресторан» — это не только «Макдоналдс». Чего стоит хотя бы пример кафе «Андерсон», основательница которого Анастасия Татулова во время пандемии стала едва ли не главным героем ресторанного бизнеса. Впрочем, владельцы семейных заведений геройствуют не только в кризис: они каждый день пытаются завоевать доверие гостей с детьми, накормить маленьких посетителей полезной едой и создать комфортную атмосферу и для семей, и для тех, кто просто зашел на бизнес-ланч.

Игровая площадка по пути на кухню

В интервью 2013 года ресторатор Екатерина Ковалевская отмечала: детям в ресторанах всего мира не рады. «Только сети фастфуда действительно ориентированы на семьи с детьми. Тут будут и стульчики для малышей, и отдельные игровые площадки, и детские обеды с игрушками», — рассказывала она.

Но с тех пор подход кидс-френдли стал настоящим трендом в индустрии: детскую зону с раскрасками и акулой из «Икеи» можно встретить во многих ресторанах и кафе. Причем не только в двух столицах, но и в регионах. Например, в екатеринбургском ресторане чешской кухни Pan Smetan работает детская комната «Игренок»: здесь есть бассейн с шариками, развивающие игры и няня, которая занимается с малышами. Небольшой уголок обустроили в самарской кондитерской «То самое место»: пока взрослые едят круассаны и пирожные, детей ждут игрушки и грифельная доска для рисования. А в детских зонах сети «Кыстыбый» в Казани маленьких гостей встречают домики с крышей-шатром.

Без острых углов и розовых пони

Детская зона может быть спланирована как отдельная комната в поле зрения родителей, обособленное помещение в общем зале или вписана в пространство ресторана без всяких границ.

  «Мы концептуально против отдельной игровой комнаты: не надо “cбрасывать” туда ребенка, если можно провести с ним время. Важно просто адаптировать пространство: во время ремонта мы думаем, где посадим мам с малышами, а в каком зале разместим гостей без детей, но не обозначаем это визуально. Поэтому часто там, где мы планировали рассаживать взрослых гостей, сидят родители с подросшими детьми, которые считают, что уже выросли из игровой».
Директор по маркетингу сети Kitchen Евгения Семина

«В наших ресторанах есть большие зоны с игровыми городками, игрушками, мастер-классами, аниматорами. Посадка организована в том числе вокруг игровых пространств — для тех родителей, которые хотят активно наблюдать, что происходит с их ребенком. Но есть и те зоны, где гости просто сидят и едят. Хотите быть рядом с ребенком — пожалуйста. Хотите отдыхать отдельно — можете расположиться в одном зале, а ребенок будет веселиться в другом. На этот случай по ресторану развешаны телевизоры, где транслируется, что происходит в игровой зоне».
Директор по маркетингу ресторана Ribambelle Елизавета Груздева

Не обязательно, чтобы игровая комната или весь семейный ресторан выглядел как замок принцессы или «Леголенд»: цветастые интерьеры быстро утомляют и взрослых, и детей. С другой стороны, маленькие гости не всегда аккуратны: вряд ли отпечатки их измазанных вареньем ладошек украсят светлые стены и диваны. 

В зоне для малышей не должно быть розеток, острых углов, мелких элементов интерьера — всего, что может навредить ребенку. Мебель стоит выбрать компактную и легкую, но при этом крепкую и не травмоопасную. Игрушки нужно регулярно обрабатывать антисептиками: например, в сухих бассейнах в ресторанах Ribambelle шарики дезинфицируют дважды в день. Также важно наличие низкой раковины, где ребенок сможет помыть руки, или хотя бы стульчика-подставки, чтобы дотянуться до крана. И, конечно, в ресторане нужно предусмотреть место для парковки колясок и пандус для заезда — это знак уважения к родителям.

Мастер-классы под присмотром нянь

Держать постоянного сотрудника для присмотра за детьми в заведении, где детская аудитория не основная, затратно. Но для семейного кафе это настоящий must have. Например, в сети семейных кафе «Бабушка приехала» в Санкт-Петербурге с детьми каждый день (и бесплатно) работает няня 0+. В Kitchen есть собственное event-подразделение для организации праздников и штатные аниматоры. «Они специализируются на ресторанной анимации, прекрасно знают наше детское пространство, понимают, куда встать и как направить внимание маленьких гостей, чтобы они сконцентрировались на программе», — рассказывает Евгения Семина. В Ribambelle аниматоры проходят специальную подготовку: занимаются с психологом, педагогами по актерскому мастерству и игротехнике, чтобы во время активных игр и танцев не просто развлекать детей, но и развивать их эмоциональный интеллект и полезные навыки.

Еще один способ занять ребенка — кулинарные мастер-классы, которые сегодня предлагает большинство кидс-френдли ресторанов. Например, в московском ресторане Da Pino детей бесплатно приглашают в «Школу юного пиццайоло», в петербургском «Марчеллисе» продают абонементы на детские кулинарные курсы, а в «Цехе» в Екатеринбурге учат рисовать. Это хороший способ заработать лояльность аудитории, но не деньги. «У таких занятий символическая цена: окупается только работа ведущего и продукты», — говорит представительница сети Kitchen.

Сосиски-осьминоги и дорогая вермишель

Большое внимание нужно уделить меню: решить, будут это мини-версии «взрослых» блюд, бургеры и картошка-фри или исключительно здоровая еда без лактозы, арахиса, других аллергенов или грибов, которые не рекомендуют детям до 12 лет.

«Мы не заигрываем с детским меню. В нем есть куриная котлета с пюре, котлета из палтуса с макаронами, то есть те позиции, которые не вызывают у мам опасения и вопросов вроде “Из чего это приготовлено?” или “Что будет с моим ребенком, если он это съест?”. Плюс сейчас есть тренд на то, чтобы пища, особенно для детей, была здоровой, понятной, из качественных продуктов. Для нас это правило, хотя несколько лет назад мы все же по просьбам родителей ввели в меню картофель фри». Директор по маркетингу ресторана Ribambelle Елизавета Груздева

Маленькие гости любят максимально простые блюда, поэтому угодить им проще: они не хотят морепродукты или стейки из мраморной говядины, а вот высокомаржинальные блюда из свежих овощей, фарша или супы идут на ура. Их рентабельность на 30% выше, и это еще один повод бороться не против малышей в ресторанах, а за них. Правда, некоторые детские продукты все же дороже: фигурная вермишель в форме букв или котлеты для бургеров из диетического фарша.

«Мы помним об интересах разных возрастных групп: у нас есть и крем-суп из протертых овощей, аналог первого прикорма, и детский бургер с картошкой фри для подростков. Учитываем историю с аллергией, поэтому готовим безглютеновые тефтельки. Также уделяем внимание оформлению: в меню есть котлетки в виде мордочки мышки, сосиски из индейки, которые подаются в форме осьминогов — чтобы малышу было и весело, и интересно есть. Для взрослых и детей готовим из одинаково свежих и натуральных продуктов, просто меняем форму: если взрослому подаем куриную грудку, то ребенку — куриные котлетки». Директор по маркетингу сети Kitchen Евгения Семина

Важно не только что есть, но и чем: Елизавета Груздева советует уделить внимание детским столовым приборами. Это вопрос безопасности ребенка: большой «взрослой» вилкой малышу управлять сложнее, поэтому он может ей пораниться.

Кричать в игровой, а не за столом

Едва ли не самая главная задача ресторатора — сделать так, чтобы в заведении было комфортно и семейной аудитории, и гостям без детей. В той же сети Kitchen таких 40%: многие заходят на бизнес-ланчи, да и родители сами не против пообедать в одиночку, пока школьники на занятиях. В основном семейные гости не засиживаются по вечерам и уже уходят, когда начинается основной поток. Но даже если аудитории пересекаются, примирить их можно. Главное, чтобы и те, и другие помнили, что пришли в семейный ресторан: детей здесь ценят, но и им самим позволено не все.

«Мы спокойно относимся к тому, что некоторым гостям некомфортно в детском обществе, но для них существует масса других заведений. А с теми, кто любит детей, мы всегда находим общий язык — не важно, с малышами они пришли или нет, — рассказывает Евгения Семина. — Мы стараемся так организовывать пространство и занимать детей, чтобы они не мешали взрослым отдыхать. Если видим, что ребенок скачет на голове, переворачивает солонки на всех столах, кричит, то предлагаем ему раскраску, стараемся отвлечь, направить его энергию в мирное русло».

Любовь как секретный ингредиент

К работе с детьми в семейном ресторане должны быть готовы все сотрудники в зале. По словам Евгении Семиной, уже на этапе отбора в Kitchen обращают внимание на то, как ведет себя стажер, если ему под ноги бросается ребенок. «Это не должно ни бесить, ни раздражать. Поэтому у нас работают или те, у кого есть дети, младшие братья и сестры, или те, кому просто близка детская тема», — объясняет она. А в Ribambelle есть своя система обучения и аттестации, во время которой оцениваются навыки поведения в сложных ситуациях. «Еще на старте мы предупреждаем официантов, что им нужно будет и принести слюнявчик, и посадить ребенка на стульчик. А если ребенок обольется, запачкает футболку, то официант предложит маме забрать, постирать и высушить одежду, а взамен подарит наши брендированные футболку и штанишки», — рассказывает Елизавета Груздева.

При этом родителей с детьми эксперты не считают сложной аудиторией — скорее, уставшей. «К нам приходят мамы, которые нервничают или спешат, но если помочь им справиться с проблемами, то они станут очень благодарными гостями. Ведь самая большая ценность для родителей — видеть, что их ребенку рады», — уверена Евгения Семина. Но и права на ошибку у ресторана тоже нет: в детском сегменте хорошо работает сарафанное радио, и разрушить репутацию может даже один расстроенный родитель. Чтобы завоевать лояльность семейной аудитории, можно предложить гостям скидку, десерт в подарок или бесплатный комбо-обед для малыша. Сегментировать аудиторию и рассказать о спецпредложении поможет сервис r_keeper Loyalty.

Не всем заведениям стоит быть кидс-френдли, строить детскую комнату и нанимать аниматоров: это будет странно смотреться в баре или ресторане высокой кухни, где часто проводят деловые переговоры. Но тем, кто все же решит работать с маленькими гостями, поможет простой совет Евгении Семиной: быть кидс-френдли — значит просто искренне любить детей. «С любой аудиторией работать можно только по любви. И не важно, какие это гости: семьи с детьми или рокеры-байкеры. Если у вас это находит отклик, если проект изначально создается с душой, аудитория обязательно это почувствует», — соглашается Елизавета Груздева.

Lege Artis — Евгения Семина

Евгения Сёмина

Тренинги для руководителей

Бизнес-тренер по управлению персоналом

Москва – Киев

Образование
Основное
2002 — Московский Педагогический Государственный Университет, ф-т Психологии и Педагогики,
Диплом
Повышение квалификации/курсы
2008 — Методы организационной диагностики., АНХ Школа консультантов по управлению
А.И. Пригожина, Москва, Сертификат
2007 — Программа Success Insights® DISC для профессионалов,, Диалог Менеджмент Консалтинг
Москва, Сертификат

Профессиональный Опыт
10.2007 –н/вр. (Москва)
Тренинговая Компания ООО «Мастерская руководителя»
Управляющий партнер
Организация, разработка и проведение многоуровневых комплексных программ обучения
руководителей
Организация, разработка и проведение тренингов для специалистов
Предварительная диагностика и оценка персонала
Разработка и внедрение моделей компетенций
Разработка и проведение Центров Оценки по технологии Assessment-Center (SHL)
Консультирование заказчика по вопросам управления персоналом
Организация и проведение посттренингового сопровождения
Клиенты и Партнеры:УК «Альфа-Капитал», ОАО»Промсвязьбанк», ТатНефть, Тетрапак, СуперДжоб,
Корпоративный Университет МинЭнерго, УК «Альфа Управление Капиталом (Украина), Эрикссон,
TEZ Tour и другие.

01.2006 — 11.2007 , ОАО «Альфа-Банк» (Москва)
Банки/кредиты/инвестиции/лизинг
Начальник группы обучения, тренер
Отладка и поддержание системы обучения в call-center с нуля: диагностика проблемных зон, переработка тренингов, обучение тренеров, введение в программу обучения новых тренингов.
Разработка и проведение тренингов (soft-skills)
Разработка и организация проведения тренингов по продукту
Планирование и организация работы группы обучения
Разработка и проведение тренингов в Москве и регионах
Участие в долгосрочных проектах по обучению в различных блоках Банка
Разработка модели компетенций
Разработка и проведение ассессмент-центров
Оценка эффективности обучения
Обучение и развитие тренеров
Управление группой тренеров (4 человека)

08.2003 — 05.2006 , ЗАО Фирма ЦВ «ПРОТЕК» (Москва)
Тренинг-менеджер
Диагностика проблемных зон и потребности в обучении в подразделениях Компании;
Составление планов обучения для Москвы и регионов;
Оценка эффективности обучения;
Разработка «Стандартов визита» для менеджеров по продажам;
Гибкий подход к обучающим программам: тренинги разрабатываются под конкретное;
подразделение, на основании конкретных задач и особенностей участников;
Разработка и проведение тренингов в Москве и регионах;
Обучение и наставничество для новых тренеров;

Авторские программы:
Ответственный сотрудник – Миф или Реальность? Управление ответственностью
подчиненных
Авторитет и позиционирование руководителя
Управление по результату – как сохранять огонь в глазах сотрудников и достигать
результатов, при этом экономя на премиях
Все начинается с правильных людей. Как руководителю оценить профессионализм и
мотивацию кандидата.

Управленческие тренинги:
Подбор и адаптация сотрудников
Оперативное управление ежедневными задачами
Ситуационное руководство по Кену Бланшару
Мотивирование персонала
Развитие сотрудников: наставничество и коучинг
Технология ведения совещаний
Формирование команды
Организация и планирование работы
Другие тренинги, которые я провожу:
Технология и психология продаж
Переговоры: жесткие переговоры и стратегия выигрыш-выигрыш
Личный тайм-менеджмент
Эффективная коммуникация
Стресс-менеджмент
И другие

Евгения Александровна Сёмина | репетитор на profi.ru (химия, ОГЭ по химии, ЕГЭ, ОГЭ).

Елена Владимировна

Пять с плюсом10 мая 2020

Химия

Светлана

25 сентября 2019

Химия

Ребенку нужен был репетитор по химии. Основная цель – разобрать сложные вопросы по новому материалу школьной программы, научиться решать задачи по новым темам. Выбрали Евгению Александровну. Она откликнулась на нашу заявку, договорились о встрече. Занятие состоялось. Все оперативные вопросы разобрали. Под ее чутким руководством дочка прорешала ряд задач, как оказалось – не зря. На очередном уроке прошла самостоятельная работа, к ней дочка была готова, чувствовала себя уверенно, т.к. уже поняла, как решать такого рода задачи.
Евгения Александровна располагает к себе, даже наша «дикая» кошка подошла к ней и дала себя погладить.
На занятии ребенок не чувствовал себя скованно, если что-то было не совсем понятно, и дочка ошибалась в ответе на заданный вопрос, то Евгения Александровна не ругала, а наоборот подбадривала, направляла, указывала на какие-то нюансы, которые помогали затем найти верный ответ или решение. На мой взгляд, как раз очень важно, чтобы не просто найти нужный ответ, а уметь выстроить логическую цепочку, которая в результате приведет к верному решению.
Евгения Александровна очень хорошо объясняет теоретический материал и дает грамотные рекомендации по решению задач, что потом помогает чувствовать себя уверенно на уроках в школе. К сожалению, продолжить занятия с Евгенией Александровной не сможем, т.к. нам нужны регулярные занятия. График, который она нам предложила, нас не совсем устраивает. Пока нам знакомые порекомендовали другого преподавателя, продолжим занятия с ним.
Оценка Евгении Александровне за проведенное занятие – 5. Компанию PROFI.RU благодарим за то, что здесь есть база высококлассных специалистов, к которым можно обратиться в любой момент по различным вопросам. Если что-то у нас поменяется, то, конечно же, обратимся в PROFI.RU.

Семина Евгения Николаевна, ГБОУ Школа № 1241, Москва

Занимаемая должность (должности):
Учитель-логопед

Корпус:

корпус 7

Уровень образования:
Высшее

Наименование оконченного учебного заведения:
1.Александровский профессиональный агротехнический лицей №38 2. Московский государственный областной университет 3. Московский государственный гуманитарный университет имени М. А. Шолохова

Наименование направления подготовки и (или) специальности:
1. Дошкольное образование 2. Русский язык и литература 3. Логопедия

Общий стаж работы:
С 1998 г.

Стаж работы по специальности:
С 2008 г.

Данные о повышении квалификации и (или) профессиональной переподготовке (при наличии):

Первая квалификационная категория

1. Московский государственный открытый педагогический университет им. М. А. Шолохова по специальности логопедия (140 часов) 2006 г.
2. Московский институт открытого образования по теме «Ранняя психолого-медико-педагогическая помощь детям с ограниченными возможностями здоровья» 2011 г.
3. Государственное бюджетное образовательное учреждение высшего образования города Москвы «Московский городской педагогический университет» по дополнительной профессиональной программе: «Дифференцированный логопедический массаж при коррекции произносительной стороны речи» 72 часа 2015 г.
4. Московский городской педагогический университет по дополнительной профессиональной программе: Организация инклюзивного образования детей-инвалидов, детей с ОВЗ в общеобразовательных организациях 72 часа 2015 г.
5. Московский институт открытого образования по теме «ФГОС для обучающихся с ОВЗ (для детей с ментальными нарушениями)» 36 часов 2016 г.

e-mail:
[email protected]

O себе:

Люблю творчество

(PDF) Сравнительная оценка и научное сопровождение семеноводства нового сорта Евгения Суданграсс

(81) (Красноярск) стр. 74-93 DOI 10.12731 / wsd-

2016-9-74-93

3. Кибальник , ОП Оценка качества зерна

и биомассы сорго для использования в кормопроизводстве

/ ОП Кибальник, И. Ефремова,

Д.С.Сёмин, В.С. Горбунов, О. Каменев, В.И.

Старчак, С.С. Куколева / Зерновая промышленность России.

2019.– № 4 (64). С. 3-7. ДОИ: 10.31367 / 20 9-8725-

2019-64-4-3-7

4. Вертикова Е.А. 2017 Изучение исходного материала для селекции суданграда

в Нижнем Поволжье

(Саратов: ООО «Амирит») стр. 10-13 DOI:

https://doi.org/10.28983/asj.v0i12.270

5. Ермолина Г.М., Ковтунова Н.А., Шишова Е.А.,

Романюкин А.Е. Исходный материал суданграсса для решения основных селекционных задач

// Сельское хозяйство

наука Евро-Северо-Востока.- 2016. — №5 (54).

— С. 14-20.

6. Куколева С.С., Семин Д.С., Кибальник О.П., Старчак

В.И. Отбор образцов сортов судак

в Саратовской области // Зерновое хозяйство

Россия. 2016. № 4. С. 8-11.

7. Горпиниченко С.И., Метлина Г.В., Васильченко

С.А., Ковтунова Н.А. Урожайность и энергетическая эффективность

эффективность выращивания новых сортов

суданграсса и сорго-суданских гибридов // Зерновое

земледелие в России.- 2016. — №2 (44). — С. 79-86

8. Эльконин Л., Кибальник О., Завалишина А.,

Геращенков Г. 2018 Генетическая функция цитоплазмы

у растений с особым акцентом на

Хлоропласты и цитоплазма сорго. Структура и

Функции Sci. Publ. ed C Dejesus, L Trask (New

York: Nova), стр. 97-155

9. Кибальник О.П., Эльконин Л.А. Влияние цитоплазматического типа мужской стерильности

на содержание хлорофилла

в листьях зернового сорго. гибриды

Российский генетический журнал: прикладные исследования.

2016. Том. 6. № 5. С. 520-526.

10. Эльконин Л.А., Кожемякин В.В., Геращенков Г

А, Рожнова Н.А., Панин В.М. 2018 Эпигенетическая

регуляция цитоплазматической мужской стерильности у сорго

Международный журнал репродукции растений

с. 118 DOI:

10.14787 / ijprb.201810.2

11. Полюдина Р.И., Гришин В.М. Гетерозис

суданграсса

в Западной Сибири.Сибирский вестник

Сельскохозяйственная наука. 2017; 47 (3): 21-26.

12. Куколева С.С.1, Жужукин В.И.1, Кибальник О.П.

Natural Sciences) — 2018. VI1 No. 12-2 P. 283-

289

13. De Mesa-Stonestreet NJ, Alavi S, and Bean SR

2010 Белки сорго: концентрация,

выделение, модификация и пищевое применение

кафиринов J.Food Sci., Том 75, стр. 90-104 DOI:

10.1111 / j.1750? 3841.2010.01623.x

14. Кумар Т., Двейкат И., Сато С., Ге З., Нерсесиан Н.,

Эльтон Т. , Bean S, Ioerger BP, Tiley M и

Clemente T 2012 Модуляция хранения ядер

белков в зерновом сорго (Sorghum bicolor (L.)

Moench) Plant Biotechnology Journal 10 pp 533-44

DOI: 10.1111 / j.1467-7652.2012.00685.x.

15. Беляева Е.В., Эльконин Л.А. 2018 Экспрессия

апомиктических потенциалов и селекция на апомиксис в потомстве

сорго (Sorghum bicolor (l.)

Гибрид Moench с мужской стерильностью The International

Journal of Plant Reproductive Biology Vol 10 № 1

pp 44-51 DOI: 10.14787 / ijprb.201810.1.44-51

16. Kamthan A, Chaudhuri A, Kamthan M и Datta A

2016 Генетически модифицированные (ГМ) культуры: вехи

и новые достижения в улучшении сельскохозяйственных культур Теоретическая

и прикладная генетика. 129 1639-55 DOI:

10.1007 / s00122? 016? 2747? 6

17. Кумар Т., Хоу А., Сато С., Двейкат И. и Клементе

T 2012 Трансформация сорго: Обзор и

утилита, генетика растений и Геномика: культуры и модели

Том.11. изд. Paterson AH (New York, NY:

Springer) pp 205-21 DOI:

10.1007 / 978? 1? 4419? 5947? 8_10

18. Кибальник О.П., Ефремова И.Г., Семин Д.С., Горбунов

В.С., Каменев О.Б. Старчак В.И., Куколева С.С.

2019 Оценка качества зерна и биомассы

сорго для использования в кормопроизводстве Зерновая промышленность

Россия Том 4 (64) стр. 3-7 DOI: 10.31367 / 20 9-

8725- 2019-64-4-3-7

19. Доспехов Б.А. 1985 Полевой эксперимент

Методика (с основами статистической обработки результатов исследований

) (Москва) 352 с

20.Куперман Ф. М. 1984 Морфофизиология растений.

Морфофизиологический анализ органогенеза

Стадии различных жизненных форм покрытосеменных

(Московская высшая школа) 240 с

21. Якушевский Е.С., Варадинов Г., Корнейчук В.А.,

Баньяй Лифтер Единый класс

.

Культурные виды сорго Moench Genus

(Ленинградский Всероссийский научно-исследовательский институт растений

Промышленность им. Н.И. Вавиловой (ВИР) 35 с.

6

E3S Web of Conferences 247, 01057 (2021) https://doi.org/10.1051/e3sconf/202124701057

ICEPP-2021

Новорожденный с задержкой внутриутробного развития и псевдо-синдромом Барттера из-за тяжелого материнского расстройство пищевого поведения: отчет о болезни

Clin Case Rep. 2020 Dec; 8 (12): 2541–2544.

,
¹
,
¹
,
²
,
²
,
³
,
¹
,
¹
,
¹
,
¹
,
¹
,
¹
,
⁴
и
¹

Бабацева Евгения

¹
2-е отделение неонатологии и отделения интенсивной терапии,
Университет Аристотеля в Салониках,
Больница «Папагеоргиу», г.
Салоники
Греция,

Илиас Хатциоаннидис

¹
2-е отделение неонатологии и отделения интенсивной терапии,
Университет Аристотеля в Салониках,
Больница «Папагеоргиу», г.
Салоники
Греция,

Алексия — Анжелики Тагараки

²
4-е отделение педиатрии,
Университет Аристотеля в Салониках,
Больница «Папагеоргиу», г.
Салоники
Греция,

Despoina Tramma

²
4-е отделение педиатрии,
Университет Аристотеля в Салониках,
Больница «Папагеоргиу», г.
Салоники
Греция,

Каллиопи Дампала

³
1-е отделение акушерства и гинекологии,
Университет Аристотеля в Салониках,
Больница «Папагеоргиу», г.
Салоники
Греция,

Эфтимия Чацитолиу

¹
2-е отделение неонатологии и отделения интенсивной терапии,
Университет Аристотеля в Салониках,
Больница «Папагеоргиу», г.
Салоники
Греция,

Эфтимия Папахараламбус

¹
2-е отделение неонатологии и отделения интенсивной терапии,
Университет Аристотеля в Салониках,
Больница «Папагеоргиу», г.
Салоники
Греция,

Георгиос Мициакос

¹
2-е отделение неонатологии и отделения интенсивной терапии,
Университет Аристотеля в Салониках,
Больница «Папагеоргиу», г.
Салоники
Греция,

Христос Цакалидис

¹
2-е отделение неонатологии и отделения интенсивной терапии,
Университет Аристотеля в Салониках,
Больница «Папагеоргиу», г.
Салоники
Греция,

Параскеви Караджанни

¹
2-е отделение неонатологии и отделения интенсивной терапии,
Университет Аристотеля в Салониках,
Больница «Папагеоргиу», г.
Салоники
Греция,

Мария Литоксопулу

¹
2-е отделение неонатологии и отделения интенсивной терапии,
Университет Аристотеля в Салониках,
Больница «Папагеоргиу», г.
Салоники
Греция,

Клеантис Анастасиадис

⁴
2-е отделение детской хирургии,
Университет Аристотеля в Салониках,
Больница «Папагеоргиу», г.
Салоники
Греция,

Василики Субаси

¹
2-е отделение неонатологии и отделения интенсивной терапии,
Университет Аристотеля в Салониках,
Больница «Папагеоргиу», г.
Салоники
Греция,

¹
2-е отделение неонатологии и отделения интенсивной терапии,
Университет Аристотеля в Салониках,
Больница «Папагеоргиу», г.
Салоники
Греция,

²
4-е отделение педиатрии,
Университет Аристотеля в Салониках,
Больница «Папагеоргиу», г.
Салоники
Греция,

³
1-е отделение акушерства и гинекологии,
Университет Аристотеля в Салониках,
Больница «Папагеоргиу», г.
Салоники
Греция,

⁴
2-е отделение детской хирургии,
Университет Аристотеля в Салониках,
Больница «Папагеоргиу», г.
Салоники
Греция,

Автор, ответственный за переписку. ^* Переписка
Евгения Бабацева, 2-е отделение неонатологии и отделения интенсивной терапии, Университет Аристотеля в Салониках, больница общего профиля «Папагеоргиу», Салоники, кольцевая дорога, регион Неа Эфкарпия, 56403, Салоники, Македония, Греция.
Электронная почта: moc.liamg@3avehcababbe,

Поступила в редакцию 10 марта 2020 г .; Принято 2020 18 июля.

Copyright © 2020 Авторы. Отчеты о клинических случаях , опубликованные John Wiley & Sons Ltd Это статья в открытом доступе на условиях http: // creativecommons.org / licenses / by / 4.0 / License, которая разрешает использование, распространение и воспроизведение на любом носителе при условии правильного цитирования оригинальной работы.

Abstract

Диета матери до и во время беременности играет важную роль для развития плода. Любое расстройство пищевого поведения в этот период может вызвать временные и / или постоянные негативные последствия для матери и ее потомства.

Ключевые слова: расстройства пищевого поведения, гипокалиемия, ограничение внутриутробного развития, метаболический алкалоз, синдром псевдо-Барттера

Abstract

Диета матери до и во время беременности играет важную роль для развивающегося плода.Любое расстройство пищевого поведения в этот период может вызвать временные и / или постоянные негативные последствия для матери и ее потомства.

1. ВВЕДЕНИЕ

Синдром псевдо-Барттера, редкое заболевание, сходное с синдромом Барттера, не имеющее патологии почечных канальцев. Мы представляем случай, когда доношенный новорожденный был маленьким для гестационного возраста с метаболическим алкалозом с рождения с постепенным снижением в течение первой недели жизни. Аналогичные лабораторные данные наблюдались у матери ребенка, страдающей тяжелыми расстройствами пищевого поведения.

Синдром Псевдо-Барттера — редкое заболевание, вызываемое диетой с низким содержанием хлоридов, потерей натрия или хлоридов с мочой / стулом, а также рвотой или инфузией простагландинов.
1
,
2
Для него характерен гипокалиемический, гипохлоремический метаболический алкалоз. Другие находки включают гипонатриемию, высокий уровень ренина и альдостерона, нормальное кровяное давление и гиперплазию юкстагломерулярного аппарата.
3
,
4
,
5
Нервная анорексия (AN) и нервная булимия (BN) представляют собой тяжелые расстройства пищевого поведения, характеризующиеся серьезными поведенческими, психологическими и физиологическими нарушениями.ΑΝ / ΒΝ при беременности влияет не только на мать, но и на ее плод. Эти состояния могут вызывать перинатальную смертность, преждевременные роды и исходы для плода, как малые, так и большие для рождений в гестационном возрасте, ограничение внутриутробного развития, нейроповеденческие нарушения, а также кислотно-щелочной и электролитный дисбаланс.
4
,
6
,
7
,
8

Мы сообщаем о новорожденном с тяжелым паттерном ограничения внутриутробного развития, мать которого перенесла тяжелую АН, усилившуюся во время беременности, с сопутствующим синдромом псевдо-Барттера, приписываемым ее длительному расстройству пищевого поведения.

2. ПРЕДСТАВЛЕНИЕ ДЕЯТЕЛЬНОСТИ

Пациент, доношенный мужчина на сроке гестации 37 недель, рожденный от первородящей 26-летней матери, был госпитализирован в наше отделение интенсивной терапии вскоре после рождения с признаками респираторного дистресса и тяжелой внутриутробной задержки.

Пренатальный скрининг третьего триместра, несмотря на нормальные околоплодные воды, показал, что плод страдает задержкой внутриутробного развития. Новорожденный был симметричным, маленьким для гестационного возраста (SGA) с массой тела при рождении 2285 г (P 3-10-й), длиной 44 см (P 3-й) и окружностью головы 32 см (P 3-й-10-й).Он родился с кесаревым сечением из-за дистресса плода с оценкой по шкале Апгар 7 и 8 на 1 и 5 минуте соответственно. В анамнезе матери выявлены депрессия и нервная анорексия с 18 лет. АН усилилась во втором и третьем триместре беременности. Масса тела матери в первом и третьем триместре была 52 и 43 кг соответственно; при росте 162 см ИМТ упал с 19,8 кг / м ² до 16,3 кг / м ² . Анализ артериальной крови из пуповины в пределах нормы в соответствии с его гестационным возрастом и днем ​​жизни.9
У матери выявлен метаболический алкалоз, гипокалиемия, гипохлоремия и гипонатриемия, которые также были подтверждены в последующих измерениях. Было подтверждено, что у младенца не было эпизодов рвоты, диареи / множественного стула и что он не принимал никаких лекарств. Анализ мочи на гиперкальциурию, концентрацию хлоридов и УЗИ почек в норме. Ввиду ограничения внутриутробного развития ребенка обследовали на внутриутробную инфекцию, и результаты были нормальными. Артериальное давление ребенка при анализе крови выявило аналогичные данные (таблица).Полное парентеральное питание начинали с 1-го дня жизни (дол), энтеральное — на 2-й день с добавлением электролитов. Алкалиемия и электролитные нарушения постепенно корригировались в течение первой недели жизни. У новорожденного не было никаких признаков респираторного дистресс-синдрома после 12 часов пребывания в отделении интенсивной терапии, и после госпитализации в отделении интенсивной терапии без осложнений он был наконец выписан в 10 дол.

Таблица 1

Анализ газов крови матери и новорожденного на 1 доле

Lodium

В 6 месяцев жизни ребенок прошел нормальное физикальное обследование и обследование нервной системы.

3. ОБСУЖДЕНИЕ

Сбалансированное питание матери до и во время беременности является ключевым фактором благополучия плода и нормального внутриутробного развития.
7
Расстройства пищевого поведения во время беременности могут иметь негативное физическое и психическое воздействие на мать и ее потомство в перинатальный и послеродовой периоды.
4
Метаболический алкалоз в первые несколько дней жизни встречается крайне редко и требует подробного анамнеза матери до и во время беременности. В большинстве случаев он характеризуется отсутствием первичного поражения почек и носит преходящий характер.10
Это может быть связано с почечными, желудочно-кишечными, метаболическими, эндокринными причинами или воздействием лекарств. Кроме того, низкий уровень калия следует рассматривать как потенциально опасное нарушение электролитов.
4

Нарушения обмена веществ и электролитов у матери, подобные ее потомству, характерны для синдрома псевдобарттера.
11
Синдром Барттера (СС) — редкое наследственное заболевание почечных канальцев, которым страдает примерно 1 из 1 000 000 населения. Этот генетический дефект связан с мутациями в генах, кодирующих переносчики натрия / калия / хлорида.1
Они расположены в петле Генле и регулируют внеклеточный объем и баланс электролитов, влияя на состав жидкостей организма.
1
Общие признаки наследственной БС — многоводие, преждевременные роды, задержка роста новорожденного с полиурией и нормальное кровяное давление.
1
,
4

При синдроме псевдо-Барттера биохимические отклонения идентичны синдрому Барттера, но без генетического фона. В патофизиологию псевдобартера вовлечены различные факторы, такие как длительный прием диуретиков или простагландина E, стойкая рвота или диарея, хроническая диета с дефицитом хлоридов, злоупотребление слабительными и муковисцидоз.1
,
10
,
12
,
13
В литературе описаны многочисленные случаи синдрома псевдобарттера у новорожденных, вызванного врожденной хлоридной диареей, введением простагландина E и стойкой рвотой.
5
,
8
,
14

Расстройства пищевого поведения матери (AN, BN, компульсивное переедание [BED], другие уточненные расстройства питания и пищевого поведения [OSFED]) во время беременности напрямую связаны с кислотно-щелочным дисбалансом, а также имеют более высокий риск осложнений у плода / новорожденного по сравнению с с истощенными беременными женщинами, у которых отсутствуют симптомы.6
,
15
Киммел и др. В своем обзоре указали, что расстройства пищевого поведения связаны с серьезными гинекологическими проблемами, такими как незапланированная беременность, повышенный риск кесарева сечения, бесплодие, выкидыш, послеродовая депрессия и сексуальная дисфункция.
16
Потеря веса матери, вызванная расстройством пищевого поведения или гиперемезисом беременных, связана с задержкой внутриутробного развития плода.
10
,
17
,
18
Активная АН ассоциируется с более низким весом плаценты, симметричным ограничением роста и новорожденными с более низкой окружностью / размером головы, как это было в нашем случае.17
,
18

Ограничение внутриутробного развития предрасполагает к повреждению канальцев и долгосрочному повреждению почек с такими механизмами, как хроническая внутриутробная гипоксия и уменьшение количества нефронов.
19
Хигучи и др. Сообщили в общей сложности о 4 случаях из 153 новорожденных с низкой массой тела при рождении с синдромом псевдо-Барттера, один из которых был маленьким для гестационного возраста из двух с задержкой внутриутробного развития.
10
Кроме того, Mathot et al опубликовали аналогичный случай позднего недоношенного ребенка, соответствующий его гестационному возрасту, новорожденного, рожденного от матери с нервной анорексией и сопутствующим синдромом псевдо-Барттера.8

Материнская история тяжелой АН, связанного с ней ограничения внутриутробного развития плода, сосуществующего и преходящего метаболического алкалоза и электролитных нарушений у матери и ребенка отличает этот случай от синдрома Барттера.

4. ЗАКЛЮЧЕНИЕ

В редких случаях метаболического алкалоза в раннем возрасте следует иметь в виду, что основная причина может быть не плода / неонатального, а материнского происхождения. Подробный анамнез активного расстройства пищевого поведения матери может выявить бессимптомный псевдобарттер-синдром.Наконец, тщательное наблюдение за этими женщинами во время беременности будет способствовать правильному ведению и предотвращению осложнений как у матери, так и у новорожденных.

КОНФЛИКТ ИНТЕРЕСОВ

Не заявлено.

ЭТИЧЕСКОЕ УТВЕРЖДЕНИЕ

Получено.

БЛАГОДАРНОСТИ

Мы хотели бы поблагодарить Хелен Циркоу за формирование английского языка.

Банкноты

Бабацева Э., Чациоаннидис I, Тагараки А — А и др. Новорожденный с задержкой внутриутробного развития и синдромом псевдо-Барттера из-за тяжелого расстройства пищевого поведения у матери: отчет о клиническом случае.Clin Case Rep. 2020; 8: 2541–2544. 10.1002 / ccr3.3223
[CrossRef] [Google Scholar]

ЛИТЕРАТУРА

1.
Мацуносита Н., Нозу К., Шоно А. и др. Дифференциальный диагноз синдрома Барттера, синдрома Гительмана и синдрома псевдо-Барттера / Гительмана на основе клинических характеристик. Genet Med. 2016; 18 (2): 180-188. [PubMed] [Google Scholar] 2.
Ванхезбрук С., Аллегерт К., Ванхол С. и др. Синдром псевдо-Барттера у новорожденного, получавшего инфузию простагландина. Eur J Pediatr. 2003; 162 (9): 569-571. [PubMed] [Google Scholar] 3.Bahia A, Mascolo M, Gaudiani JL и др. Синдром псевдо-Барттера при расстройствах пищевого поведения. Int J Eat Disord. 2012; 45 (1): 150-153. [PubMed] [Google Scholar] 4.
Джентиле MG. Синдром псевдо-Барттера из-за скрытого очищающего поведения при нервной анорексии. J Nutr Disord Ther. 2012; 02 (01): 2-4. [Google Scholar] 5.
Вора С., Ибрагим Т., Раджадурай В.С. Псевдо-Барттерский синдром у матери, связанный с тяжелой перинатальной травмой головного мозга. Indian Pediatr. 2017; 54 (9): 771-773. [PubMed] [Google Scholar] 6.
Динас К., Даниилидис А., Сику К. и др.Нервная анорексия при беременности: описание случая и обзор литературы. Obstet Med. 2008; 1 (2): 97-98. [Бесплатная статья PMC] [PubMed] [Google Scholar] 7.
Солми Ф., Саллис Х., Шталь Д. и др. Низкая масса тела при рождении у женщин с нервной анорексией. Epidemiol Rev.2014; 36 (1): 49-56. [Бесплатная статья PMC] [PubMed] [Google Scholar] 8.
Матот М., Матон П., Генрион Э. и др. Синдром псевдо-Барттера у беременной матери и ее плода. Педиатр Нефрол. 2006; 21 (7): 1037-1040. [PubMed] [Google Scholar] 9.
Гизингер RE, Макнамара PJ.Гемодинамическая нестабильность у новорожденных в критическом состоянии: подход к сердечно-сосудистой поддержке, основанный на патофизиологии заболевания. Семин Перинатол. 2016; 40 (3): 174-188. [PubMed] [Google Scholar] 10.
Хигучи Р., Сугимото Т., Хирамацу С. и др. Неонатальный псевдобарттер-синдром, вызванный расстройством пищевого поведения матери. J Perinatol. 2008; 28 (9): 646-648. [PubMed] [Google Scholar] 12.
Мацуносита Н., Нозу К., Йошикане М. и др. Врожденную хлоридную диарею необходимо отличать от синдрома Барттера и Гительмана.J Hum Genet. 2018; 63 (8): 887-892. [PubMed] [Google Scholar] 14.
Хегде Д., Мондкар Дж., Абдагире Н. Синдром неонатального барттера у ребенка с чрезвычайно низкой массой тела при рождении. Saudi J Kidney Dis Transpl. 2017; 28 (5): 1162-1164. [PubMed] [Google Scholar] 15.
Франко Д.Л., Блейс М.А., Беккер А.Е. и др. Осложнения беременности и исходы новорожденных у женщин с расстройствами пищевого поведения. Am J Psychiatry. 2001; 158 (9): 1461-1466. [PubMed] [Google Scholar] 16.
Киммел М.С., Фергюсон Э.Х., Зервас С. и др. Акушерские и гинекологические проблемы, связанные с расстройствами пищевого поведения.Int J Eat Disord. 2016; 49 (3): 260-275. [Бесплатная статья PMC] [PubMed] [Google Scholar] 17.
Микали Н., Стеманн Ларсен П., Страндберг-Ларсен К. и др. Размер при рождении и преждевременные роды у женщин с нарушениями пищевого поведения на протяжении всей жизни: проспективное популяционное исследование. BJOG An Int J Obstet Gynaecol. 2016; 123 (8): 1301-1310. [PubMed] [Google Scholar] 18.
Салам Р.А., Дас Дж. К., Али А. и др. Недоедание матери и задержка внутриутробного развития. Эксперт преподобный Obstet Gynecol. 2013; 8 (6): 559-567. [Google Scholar] 19.
Шарма Д., Шарма П., Шастри С.Послеродовые осложнения задержки внутриутробного развития. J Neonatal Biol. 2016; 05 (04): 232
[Google Scholar]

PSXIII-5 Возрастная динамика развития сперматогенных клеток в семенниках петухов | Журнал зоотехники

Аннотация

Клетки мужских гонад считаются ценным генетическим материалом для сохранения генофонда пород и линий сельскохозяйственных птиц, а также для направленной модификации генома птицы.Для этих целей могут использоваться зрелые половые клетки — сперматозоиды и их предшественники — сперматогонии, сперматоциты и сперматиды. Чтобы получить эти типы клеток, необходимо знать особенности их развития (сперматогенез). Изучена динамика развития определенных типов сперматогенных клеток в канальцах семенников разновозрастных петухов. Гистологические исследования проводили на семенниках петухов в возрасте от 1 недели до 6 месяцев с интервалом 2 недели.Образцы ткани семенников фиксировали в растворе Буэна. Гистологические срезы окрашивали гематоксилин-эозином. Идентификация разных типов клеток (Сертоли, сперматогонии, сперматоциты, сперматиды, сперматозоиды) проводилась по их морфологии. В возрасте 1–6 недель в семенных канальцах петухов отмечалось преимущественно наличие двух типов клеток: клеток Сертоли и сперматогониев. С 7-недельного возраста сперматоциты определяли в семенных канальцах, с 4-х месяцев — сперматиды, в 5-ти.5 месяцев — сперматозоиды. Количество клеток Сертоли практически не изменилось с возрастом и составило 21 ± 2. Процент этих клеток уменьшился с возрастом с 71 ± 3% до 5 ± 1%. Процент сперматогоний также снизился с возрастом с 75 ± 2% до 7 ± 1%. Количество сперматид и сперматозоидов, напротив, увеличилось к периоду полового созревания (6 месяцев) и достигло 54%. Работа поддержана РФФИ в рамках проекта 18-29-07079.

Этот контент доступен только в формате PDF.

© Автор (ы) 2019. Опубликовано Oxford University Press от имени Американского общества зоотехники. Все права защищены. Для получения разрешений обращайтесь по электронной почте: [email protected].

Две неголономные хаотические системы. Часть I. К задаче Суслова

Семен Варламов из НХЛ обвиняется в нападении и похищении русской модели

Российская модель утверждает, что бойфренд звезды НХЛ, обвиненный в нападении и похищении, «смеялся, когда избивал ее в пьяной ярости»

• Колорадо Варламов вратарь, 25 , обвиняется в похищении второй степени и нападении третьей степени
• Он якобы избил свою модельную подругу Евгению Вавринюк рано утром в понедельник
  
• В четверг она рассказала журналистам, что он смеялся, когда бил ее и что «когда он пьет, он превращается в животное»
  
• Отец Варламова заявил в СМИ о невиновности своего сына и сказал, что он только пытался отвести свою девушку в кино
• Представитель российского правительства заявил, что арест Варламова был произведен диверсия против хоккейной команды страны в преддверии Зимних игр
• 906 92 Зарплата Варламова в «Лавине» в прошлом году составила 3 ​​миллиона долларов
  

Автор Снежана Фарберова

Опубликовано: 19:14 BST, 31 октября 2013 г. | Обновлено: 02:19 BST, 1 ноября 2013 г.

Женщина, которая обвинила вратаря Colorado Avalanche Семена Варламова в нападении и похищении ее, рассказала журналистам в четверг, что он смеялся, когда бил ее в их квартире в Денвере.

Уроженка России 24-летняя Евгения Вавринюк, которая говорила через переводчика, сказала, что Варламов пил более 12 часов, прежде чем напал на нее.

«Он веселился, смеялся», — сказала модель. «Он не знает, когда бросить пить, а когда он пьет, он превращается в животное».

Прокрутите вниз, чтобы увидеть видео

Насилие: Евгения Вавринюк рассказала следователям, что Варламов ударил ее ногой в грудь, сбив с ног. и топнула ее в грудь, когда она лежала на земле в своей квартире

День в суде: 25-летний Семен Варламов, стартовый вратарь «Колорадской Лавины», впервые предстал перед судом в начале этого месяца по обвинению в похищении и нападении

Вавринюк встречался Варламова на год.Он был арестован за то, что якобы избил свою неоднократную, но не бывшую образцовую подругу в ходе того, что власти называют инцидентом с домашним насилием.

Она рассказала в суде, как ее парень-вратарь ростом 6 футов 2 209 фунтов ударил ее ногой в грудь и наступил на нее, когда она лежала на земле, прежде чем он вытащил ее за волосы из спальни в ранние часы. Утро понедельника.

Она указала на свою грудь, руки, живот, шею и голову — места, где, по ее словам, у нее синяки. Она также сказала, что он выгнал ее из квартиры, сообщает The Denver Post.

Вавринюк признала, что это не первый раз, когда ее парень причинил ей боль, но выброс ее на улицу был «последней каплей».

Игра продолжается: судья установил залог Варламова в размере 5000 долларов и вынес судебный запрет. за свою девушку

Красавица и «Чудовище»: снова и снова подруга Варламова, которую многие СМИ опознали как российскую модель Евгения Вавринюк (справа), обвинила звезду НХЛ в том, что та таскала ее за волосы, толкая к пол и топчет ее в пьяном бешенстве

«Она хочет убедиться, что он за это наказан», — сказал Вавринюк через переводчика Диану Сенову и невесту ее адвоката Роберта Абрамса.

‘(Варламов) очень высокомерен и думает, что ему все сойдет с рук, что он может ее избить, и никто никогда об этом не узнает. в других странах, но она по-прежнему надеялась, что он может измениться, поскольку она любила его и хотела иметь с ним детей.

Она сказала, что разорвала модельный контракт в Гонконге, чтобы приехать в Денвер, чтобы быть с ним, «потому что он попросил ее об этом», — сказала Сенова.

Варламов, 25 лет, обратился в полицию вечером в среду после тренировки с командой в тот день. Он был арестован по подозрению в похищении второй степени и нападении третьей степени.

По сообщениям новостей, Варламов и Вавринюк, известные ее друзьям как «Иви», были в непростых четырехлетних отношениях, которые были прерваны разрывом.

Неясно: Джон Ротоле, поверенный вратаря Colorado Avalanche Семена Варламова, заявил, что его клиент невиновен

Его агент, Пол Теофанос, заявил, что Варламов «полностью невиновен по всем этим обвинениям.’

В заявлении The Avalanche говорится, что им известно об обвинениях, но они не будут комментировать дальнейшие действия до завершения расследования.

Приобретенный у Вашингтона в ходе обмена в 2011 году, Варламов в этом сезоне показывает счет 7: 1 при среднем значении 1,76 гола. В прошлом году вратарь заработал 3 миллиона долларов.

Согласно судебным документам, обнародованным в четверг, Варламов затем сказал ей по-русски, что «если бы это была Россия, он бы избил ее больше»

Звезда НХЛ появилась в зале суда в Денвере в четверг в оранжевой тюремной одежде. .

Судья установил размер залога в размере 5000 долларов и издал запретительный судебный приказ в отношении своей девушки. Варламову также разрешили путешествовать со своей командой. В случае признания виновным Варламову грозит от двух до шести лет лишения свободы.

Ссора предполагаемых любовников произошла в понедельник в квартире пары в доме 1700 по Бассет-стрит в Денвере.

Ордер на арест Варламова и письменные показания под присягой утверждают, что 25-летний спортсмен прижал свою девушку лицом к полу, схватил ее за руки и встряхнул, прежде чем повалить на пол.

«По ее словам, это самое незначительное из полученных ею побоев. Всего она получила пять, и последнее до потери сознания », — сказал адвокат Вавринюка Роберт Абрамс.

Абрамс сказал, что его клиент провел пять часов в больнице после избиения в понедельник.

Роковые отношения: Варламов, изображенный слева в дни его пребывания в Вашингтон Кэпиталз, встречается с Вавринюк (справа) в течение последних четырех лет, за это время, по словам ее адвоката, он напал на нее пять раз

‘На этот раз Эви сказала: нам: «Вот и все, заприте его», — сказал Абрамс.«Эта девушка ростом 5 футов 3 и 100 фунтов стерлингов; он профессиональный атлет ростом 6 футов 2 210 фунтов. Это очень значительная сила, приближающаяся к вам. Это ужасно ».

Отец Варламова, Александр, преуменьшил значение дела о домашнем насилии и встал на защиту своего сына в интервью российскому Р-Спорт.

«Я могу сказать со всей ответственностью только одно: никакого преступления не было совершено», — заявил он, добавив, что у его сына «нет серьезных проблем».

Многие предполагали, что Варламов будет приглашен в качестве Стартовый вратарь олимпийской сборной России на зимних Играх в Сочи в следующем году.

В свете его ареста некоторые российские официальные лица, не теряя времени, обвинили Соединенные Штаты в саботаже.

Stunner: Российская модель сказала, что она «опечалена» прекращением дела

Депутат Государственной Думы Игорь Ананских, член националистической партии ЛДПР, назвал арест Варламова «спортивным и политическим ходом».

«Основная цель — отстранить его от тренировок и игр, чтобы он потерял тренировку и пропустил Олимпиаду», — сказал Ананских.

Член ЛДПР пообещал использовать свое влияние в качестве главы комитета российского парламента по физической культуре и спорту, чтобы «повлиять на ситуацию».

По данным российского таблоида «Дни.ру», Варламов и светловолосая фотомодель уже заявляли, что он уходит, по крайней мере, однажды, но женщина, которая проживает в основном в России, вернулась в Денвер на трехмесячный срок и снова переехала к нему. .

В ответ на арест Варламова модель написала в своем российском аккаунте в социальной сети «ВКонтакте», который с тех пор был удален: «Если мужчина поднял руку на женщину — он сделает это снова.И никакие клятвы и заверения не должны поколебать решимость женщины ».

Восходящая звезда: Варламов входит в число лидеров НХЛ по количеству забитых мячей, побед и сейвов

Она продолжала говорить:« Расстанься с этими мужчинами вместо того, чтобы чувствовать. жаль их! ‘

По словам отца хоккеиста, единственным преступлением его сына было то, что он решил «против ее воли» повести свою девушку в кино, и она поспешила выдвинуть против него обвинения, сообщает «Русский вестник».

Теория заговора: депутат Госдумы Игорь Ананских утверждает, что арест Варламова — это диверсия в преддверии зимних Олимпийских игр.

Спектакль «Лавина» в Далласе в пятницу вечером и Варламов должен был начаться.Его дублер Жан-Себастьян Жигер так же хорошо играет в воротах, записав два локаута.

Варламов находится в разгаре нового сезона под руководством нового тренера Патрика Роя и команды, в которую входит гуру вратарей Франсуа Аллер, который когда-то был наставником Роя и Жигера.

Рой и Аллер вернули Варламову уверенность через год после того, как он пропустил три гола за игру. Варламов сказал, что приписывает свое улучшение тому, что Аллер изменил свою форму в воротах. Он сказал, что это всего лишь незначительные поправки, но не стал вдаваться в подробности того, что они собой представляют.

Что бы ни изменилось, оно окупилось, поскольку он входит в число лидеров НХЛ по проценту забитых мячей, побед и сейвов.

После тренировки в среду защитник Avalanche Эрик Джонсон сказал, что «было здорово увидеть, как Варли стал элитным голкипером НХЛ». в эпителии кишечника

Границы | Повышенная эффективность вакцинации вирусом осповакцины у пожилых по сравнению сМолодые мыши

Введение

Пожилые люди имеют повышенную восприимчивость к вирусным и бактериальным инфекциям (1), а среди людей старше 65 лет около трети смертности связано с инфекциями (2, 3). Профилактическая вакцинация рекомендуется пожилым людям для снижения бремени и тяжести инфекционных заболеваний (4). Однако пожилые люди плохо реагируют на большинство существующих вакцин, включая вакцины против вируса гриппа, пневмококка, гепатита B, столбняка, коклюша и дифтерии (5–10).Поэтому важно искать способы преодолеть этот барьер.

Считается, что сообщаемое снижение приспособленности иммунной системы с возрастом способствует снижению эффективности вакцины у людей и мышей (5, 6, 11, 12). Это снижение влияет как на врожденный, так и на адаптивный иммунитет. Сообщалось о нарушении распознавания микроорганизмов и их компонентов, неадекватной передаче сигналов рецепторами и изменении продукции цитокинов (13). Кроме того, была отмечена дисфункциональность клеток врожденного иммунитета, таких как нейтрофилы, NK-клетки, моноциты, макрофаги и дендритные клетки, в их способности мигрировать, осуществлять фагоцитоз, убивать бактерии и секретировать цитокины (2, 14–16).С возрастом также происходит снижение эффективности многих аспектов адаптивного иммунного ответа. Это включает уменьшение количества наивных Т-клеток, уменьшенный репертуар TCR, нарушение клональной экспансии и генерации функциональных эффекторных Т-клеток и Т-клеток памяти, снижение рекомбинации переключения класса иммуноглобулинов, а также ограниченное разнообразие В-клеток и продукцию антител (7, 11, 17 ).

Вирус осповакцины (VACV), поксвирус дцДНК (18), представляет собой вакцину, используемую для искоренения оспы (19). VACV реплицируется в цитоплазме инфицированных клеток и имеет большой геном, содержащий ~ 200 генов (20).От одной трети до половины этих генов кодируют белки, предназначенные для уклонения от иммунитета (21). Хотя VACV является иммунодепрессивным, вакцинация VACV у людей и мышей приводит к генерации надежных, устойчивых антител и Т-клеточной памяти, которая обеспечивает защиту от повторного инфицирования (21-25). Способность VACV генерировать такую ​​мощную гуморальную и клеточную память и его доказанная способность защищать население от инфекционных заболеваний делают его отличной модельной системой для изучения иммунного ответа на вакцинацию.В этом исследовании мы используем мышиную модель внутрикожной вакцинации VACV, которая генерирует защитный иммунитет против повторного инфицирования (26). В этой модели и антитела, и Т-клеточные ответы памяти являются устойчивыми и последовательными и способствуют защите от последующего заражения VACV (27, 28). Хотя VACV интенсивно изучается на множестве моделей, влияние старения на иммунную реакцию и реакцию вакцинации на VACV не исследовано. В этом исследовании мы проанализировали врожденный и адаптивный иммунный ответ на инфекцию VACV и оценили последующую устойчивость к повторной инфекции у трех разных возрастных групп мышей.

Материалы и методы

Животные и дизайн исследования

В исследовании использовали

самок мышей C57BL / 6. Все животные были приобретены у Charles River и содержались в условиях, свободных от определенных патогенов, на базе биомедицинских служб Кембриджского университета. Все эксперименты на животных проводились в соответствии с Законом о животных (научные процедуры) 1986 года под PPL 70/8524, выпущенным Министерством внутренних дел Великобритании.

Эксперименты на животных включали внутрикожную (i.d.) вакцинацию и интраназальную (i.п.) вызов (рисунок 1). Животные в возрасте 7, 22 и 54 недель получали i.d. инъекции 10 ⁴ бляшкообразующих единиц (БОЕ) штамма VACV Western Reserve (WR) или контрольного носителя (0,01% BSA / PBS) в обе ушные раковины. VACV, используемый для заражения животных, очищали от инфицированных клеток путем осаждения на сахарозной подушке и затем с помощью градиента плотности сахарозы. Инфекционные титры вирусов определяли с помощью анализа бляшек на клетках BSC-1 и замораживали при -70 ° C до использования. Для оценки иммунного ответа во время острой стадии после вакцинации ткани уха и шейные дренирующие лимфатические узлы (dLN) собирали на день (d) 7 после i.d. инфекция для измерения инфекционных вирусных титров (с помощью анализа бляшек), инфильтрации лейкоцитов (с помощью FACS) и уровней цитокинов / хемокинов (с помощью анализа Luminex). Сыворотку и селезенку получали через 29 дней после i.d. инъекции для измерения титров нейтрализующих антител против VACV и состава субпопуляций Т-клеток.

Рисунок 1 . Экспериментальная дизайн. В исследовании использовались группы ( n = 4–5) мышей C57BL / 6 в возрасте 7, 22 и 54 недель. Различные параметры были измерены до и через 7 и 29 дней после внутрикожного введения (т.е.d.) инфицирование 10 ⁴ БОЕ VACV WR, а также последующее интраназальное (i.n.) заражение иммунизированных или наивных мышей ~ 10 ⁷ БОЕ VACV WR. Создано с помощью BioRender.

Для оценки эффективности вакцинации вакцинированных мышей (через 33 дня после инфицирования VACV i.d.) и наивных (невакцинированных) мышей заражали i.n. с ~ 10 ⁷ БОЕ ВАКВ WR. Ежедневно контролировали массу тела животных. Целые легкие собирали через 12, 24 и 48 часов после заражения для измерения вирусной нагрузки и уровней цитокинов / хемокинов в ткани.

Исходные иммунологические параметры были измерены в крови, селезенке и легких наивных, неинфицированных животных ( n = 4).

Проточная цитометрия

Анализ

FACS был проведен для измерения иммунных клеток, присутствующих в ткани уха, цервикальном dLN, крови и селезенках вакцинированных и имитационно вакцинированных животных.

Ушные раковины были собраны через 7 дней после рождения. инфекции, затем разделили на дорсальный и вентральный слои и оба листочка поместили в 1.5 мл среды RPMI-1640 (Gibco, Cat. # 21875034), содержащей 750 Ед / мл коллагеназы I (Gibco, Life Technologies, Cat. # 17018-029) и 100 Ед / мл ДНКазы I (Invitrogen, Cat. № 18047-019) с последующей инкубацией в течение 1 часа при 37 ° C на орбитальном шейкере при 1100 об / мин. Суспензии, содержащие переваренные образцы ушей, растирали через клеточный фильтр с размером ячеек 70 мкм, смешивали с 10 мл среды RPMI-1640, содержащей 35% изотонического перколла (Sigma, № по каталогу P1644-500ML), и центрифугировали в течение 10 минут при относительном центрифугировании 940 мл. усилие (rcf) без использования тормоза при 21 ° C.Затем супернатанты удаляли и клетки промывали PBS.

Для получения клеток из селезенки или dLN органы измельчали ​​через фильтры для клеток 70 мкм и промывали PBS.

Перед окрашиванием антителами приготовленных клеточных суспензий эритроциты (RBC) лизировали с помощью BD Pharm Lyse (BD Biosciences, Cat. # 555899) и дважды промывали. Затем суспензии пропускали через фильтры предварительного разделения 70 мкм (Miltenyi, Cat. № 130-095-823) и подсчитывали клетки с использованием NucleoCounter NC-250 (Chemometec).

Для окрашивания маркеров клеточной поверхности образцы инкубировали с красителем Zombie Fixable Viability (дополнительная таблица 1) и, после одной стадии промывки, очищенными крысиными антителами против CD16 / CD32 мыши (Mouse BD Fc Block) (BD Biosciences, Cat . # 553141) добавляли к суспензии клеток для блокирования неспецифического связывания. Для внутриклеточного окрашивания Bcl-6 и Ki-67 использовали набор буферов для окрашивания Foxp3 / транскрипционного фактора (eBioscience, № по каталогу 00-5523-00). Затем поверхностные или внутриклеточные маркеры окрашивали моноклональными антителами (mAb).Миелоидная панель для поверхностного окрашивания ткани уха включала: CD45, Siglec-F, CD11c, CD11b, Ly6C, Ly6G, а также маркеры дамп-канала (CD3, CD5, CD19, NK1.1). Лимфоидные клетки в ткани уха идентифицировали с использованием mAb к CD45, NK1.1, CD3, CD4, CD8 и декстрамером MHC H-2Kb / TSYKFESV. Для оценки VACV-специфических CD8 Т-клеток в dLN клетки окрашивали mAb к CD45, CD19, CD3, CD8 и декстрамером MHC H-2Kb / TSYKFESV. Панель для идентификации В-клеток зародышевого центра и фолликулярных Т-лимфоцитов-помощников в dLN включала mAb к CD4, CXCR5, PD-1, B220, Bcl-6 и ki-67.Субпопуляции CD4 и CD8 Т-клеток в селезенке определяли окрашиванием mAb к CD45, CD3, CD8, CD4, CD62L и CD44 и декстрамером MHC H-2Kb / TSYKFESV. Все красители и mAb, использованные в исследовании, перечислены в дополнительной таблице 1. После заключительных этапов промывки клетки ресуспендировали в PBS, содержащем 4% параформальдегида, и анализировали с помощью FACS на BD LSRFortessa (BD Biosciences). Стратегии стробирования показаны на дополнительных рисунках 1–5.

Для анализа Trucount кровь собирали в пробирки Micro K3EDTA (Sarstedt, Cat.№ 41.1395.005) для предотвращения образования сгустков. Затем 50 мкл цельной крови переносили пипеткой на дно пробирок BD Trucount Tubes (BD Biosciences, № по каталогу 340334) с последующей 5-минутной инкубацией с Mouse BD Fc Block. Затем образцы окрашивали mAb к CD45, CD3, CD4, CD8, CD19, NK1.1, CD11b и Ly6G (дополнительная таблица 1). После лизиса эритроцитов и без этапов отмывки абсолютное количество различных популяций лейкоцитов определяли с помощью анализа на BD LSRFortessa. Стратегия стробирования показана на дополнительном рисунке 6.

Внутрисосудистое окрашивание

Чтобы отличить лейкоциты, находящиеся в ткани уха, от клеток, расположенных в сосудистой сети, проводили внутрисосудистое окрашивание, как описано (29). Вкратце, за 5 минут до отбраковки мышам внутривенно вливали в хвостовую вену mAb против CD45-BV421 (BioLegend, Cat. # 103134). Затем собирали уши и выделяли клетки, как описано выше в разделе «Проточная цитометрия». Суспензию клеток из ткани уха окрашивали анти-CD45-PE (BioLegend, Cat.# 103106). Лейкоциты крови регистрировали как дважды положительные (CD45-BV421 ⁺ CD45-PE ⁺ ) клетки, тогда как клетки тканевого иммунитета были положительными только для CD45-PE (см. Дополнительную фигуру 7).

Идентификация цитокинов и хемокинов в тканях уха, dNL и легких

Целые уши, dLN или легкие гомогенизировали в 1,5 мл пробирках с плоским дном, содержащих 400 мкл 0,5% BSA / PBS, с использованием гомогенизатора тканей OMNI с пластиковыми зондами для твердых тканей (OMNI International). Гомогенаты тканей центрифугировали при 10000 rcf в течение 20 минут при 4 ° C, супернатанты получали и хранили при -70 ° C.Наборы предварительно смешанных мультианалитов для мышей Magnetic Luminex были приобретены у R&D Systems для оценки уровней IFNγ, TNFα, IL-1β, IL-4, IL-6, IL-10, IL-33, CCL2, CCL3, CCL4, CCL5, CCL7, CCL20, CXCL1, CXCL2, CXCL5 (LIX) и CXCL10 с использованием анализатора Luminex 200 (Luminex Corporation).

Измерение вирусной нагрузки в тканях уха и легких

Целые уши и легкие гомогенизировали, как описано выше. Гомогенаты подвергались трем циклам замораживания-оттаивания-обработки ультразвуком для разрыва клеток и высвобождения вируса.Затем определяли титры инфекционного вируса в образцах уха с помощью анализа бляшек с использованием монослоев клеток BSC-1.

Нагрузку VACV в легких вакцинированных мышей измеряли путем определения числа копий вирусного генома с помощью кПЦР, как описано (30). Число копий генома хорошо коррелировало с измерением инфекционности вируса с помощью анализа бляшек (дополнительная фигура 8). Образцы супернатантов гомогенатов легочной ткани получали центрифугированием образцов при 1000 rcf в течение 5 мин с последующим 10-кратным разбавлением супернатантов водой, свободной от нуклеаз (кат.# AM9930, Амбион). Реакционная смесь для кПЦР в реальном времени включала: 2 мкл матрицы, 10 мкл 2x смеси зондов qPCRBIO (Cat. # PB20.21-5, PCRBiosystems), 0,8 мкл 10 мкМ гена VACV E9L прямой праймер (CGGCTAAGAGTTGCACATCCA) , 0,8 мкл 10 мкМ обратного праймера E9L (CTCTGCTCCATTTAGTACCGATTCT), 0,4 мкл 10 мкМ зонда E9L (зонд TaqMan MGB — AGGACGTAGAATGATCTTGTA, Applied Biosystems). Объем реакции доводили до 20 мкл водой, свободной от нуклеаз. Плазмида, содержащая ген VACV E9L , служила стандартом и была подарена Брайаном М. Уордом, Медицинский центр Университета Рочестера, США.Количественные ПЦР-анализы проводили в системе ViiA 7 Real-Time PCR System (Applied Biosystems) по следующему протоколу: этап начальной денатурации при 95 ° C в течение 3 минут, затем 40 циклов денатурации при 95 ° C в течение 5 секунд, отжиг и удлинение. при 60 ° C в течение 30 с.

Оценка нейтрализации VACV титра любого человека в сыворотке

Кровь собирали в пробирки Microvette CB на 300 мкл с активатором сгустка (Sarstedt, Cat. # 16.440.100). Образцы крови оставляли при комнатной температуре на 2 часа для образования сгустка.После центрифугирования при 10000 rcf в течение 5 минут при комнатной температуре сыворотку собирали и хранили при -70 ° C. Титры нейтрализующих антител оценивали с помощью теста нейтрализации уменьшения бляшек, как описано (31). Образцы сыворотки инкубировали при 56 ° C в течение 30 минут для инактивации комплемента, затем готовили 2-кратные серийные разведения (1:50, 1: 100, 1: 200, 1: 400, 1: 800 и 1: 1600), используя 2,5% фетальной бычьей сыворотки (FBS) / 1% PenStrep / среда DMEM. Разбавленные образцы сыворотки или контрольные образцы (только среда) были смешаны в соотношении 1: 1 со средой, содержащей 3.2 × 10 ² БОЕ / мл VACV WR, очищенного седиментацией в градиенте плотности сахарозы. После 1 ч инкубации при 37 ° C образцы титровали с помощью анализа бляшек и рассчитывали половинные максимальные ингибирующие концентрации (IC50).

Статистический анализ

Для статистического анализа использовались

SPSS v.25 и GraphPad Prism v.8. Тест Манна – Уитни U применялся для сравнения двух групп животных, а тесты ANOVA с двусторонними повторными измерениями (RM) выполнялись для анализа данных временных рядов.Корреляционный тест Спирмена использовался для анализа взаимосвязи переменных. P -значения <0,05 считались значимыми.

Результаты

Использовали три группы (возрастом 7, 22 или 54 недели [wo]) самок мышей C57BL / 6, представляющих молодых взрослых, средних и старых животных. Пятьдесят четыре животных были выбраны для представления пожилой группы на основе их общего внешнего вида (седеющая шерсть, истончение волос) и уровня смертности в колонии (летальность ~ 10% в течение 6-недельного периода, не связанного с экспериментом).Одной из особенностей иммуно-стареющего фенотипа является снижение количества наивных Т-клеток, что коррелирует с увеличением заболеваемости и смертности (32, 33). Примечательно, что у мышей из 54 человек значительно снизилось абсолютное количество клеток CD4 и CD8 в крови и селезенке по сравнению с более молодыми животными (Фигуры 2A, B). Это сокращение было связано с сокращением наивных субпопуляций клеток CD4 и CD8, в то время как количество эффекторных Т-клеток было увеличено у мышей 54 и 22 по сравнению с группой из 7 человек (Рисунок 2B, дополнительный рисунок 5).

Рисунок 2 . У пятидесяти четырехнедельных мышей уменьшилось количество наивных CD8 и CD4 Т-клеток. Абсолютное количество различных субпопуляций лейкоцитов в крови (A) и Т-клеток, выделенных из селезенки (B) мышей 7-, 22- и 54-недельного возраста (без инфекции VACV) (по четыре животных в группе ). CM, центральная память; Эфф, эффектор. P — значения, определенные с помощью теста Манна-Уитни, * p <0,05.

Иммунный ответ на внутрикожную инфекцию VACV сохраняется в разных возрастных группах

Внутрикожный (т.г) инфицирование VACV приводит к развитию кожных поражений через 5–6 дней (г) после инфицирования, которые обычно заживают в течение 21 дня (26). Используя эту модель инфекции, рекрутирование иммунных клеток, уровни цитокинов / хемокинов и вирусная нагрузка в тканях уха через 7 дней после i.d. Инфекция была проанализирована на трех разных возрастных группах мышей.

Анализ

FACS популяций лейкоцитов в инфицированном ухе показал, что ~ 97% представляли клетки, которые проникли в ткань, тогда как иммунные клетки из кровообращения составляли только 3% от общего количества лейкоцитов (дополнительный рисунок 7).По сравнению с 7- и 22-мя мышами инфицированные ушные ткани 54-х животных показали значительно меньшую инфильтрацию различных популяций лейкоцитов, включая NK, CD4 и CD8 Т-клетки, Ly6C ⁺ (воспалительные) моноциты и CD45 ⁺ . CD3 ^— CD5 ^— CD19 ^— NK1.1 ^— Siglec-F ^— Клетки CD11c ⁺ , которые представляют собой смешанную популяцию дендритных клеток и макрофагов (рис. 3А). Присутствие VACV-специфических CD8 Т-клеток в инфицированной ткани уха мышей из 54 мышей также было снижено по сравнению с другими группами (рис. 3B).Учитывая, что количество CD4 и CD8 Т-клеток у пожилых мышей было уменьшено до заражения (рис. 2), меньшее количество лимфоидных популяций, инфильтрирующих уши, вероятно, отражает снижение доступности Т-клеток в кровообращении.

Рисунок 3 . Сохранение иммунного ответа на внутрикожную инфекцию VACV в разных возрастных группах. Ткани уха собирали через 7 дней после i.d. инфицирование VACV или PBS (псевдоконтроль) от групп из 7, 22 и 54 мышей ( n = 4-5 на группу).Показаны абсолютные числа (A), различных субпопуляций лейкоцитов и (B) VACV-специфических CD8 Т-клеток, инфильтрирующих ткани уха. DC & Mϕ, дендритные клетки и макрофаги; Пн, моноциты; Значения p определяли с помощью теста Манна-Уитни, * p <0,05. (C) Уровни цитокинов / хемокинов, обнаруженные с помощью мультиплексного анализа (Luminex) в тканях уха, представлены как кратное изменение по сравнению с группой, инфицированной 7-wo VACV, которой присвоено значение, равное единице.Показаны средства; Значения p определяли с помощью теста Манна-Уитни *, p <0,05 между 7- и 54-мя животными. # p <0,05 между 22 и 54 мышами. (D) Титры VACV в тканях уха через 7 дней после i.d. заражение VACV. ПФУ, бляшкообразующие агрегаты; NS, несущественная по критерию Манна-Уитни. Эксперимент проводился дважды, и показаны репрезентативные данные одного эксперимента.

Уровни цитокинов и хемокинов, обнаруженные в ушной ткани старых животных через 7 дней после i.d. инфекция не сильно отличалась от молодых и средних возрастных групп (рис. 3С). Снижались только уровни IL-10 и CCL5, тогда как концентрации TNFα и IL-6 были увеличены у 54 мышей по сравнению с 7 и 22 животными. Однако амплитуда этих изменений не превышала 2-х кратного. Кроме того, вирусные нагрузки в инфицированных тканях уха были одинаковыми во всех группах (рис. 3D). Следовательно, инфицированная ткань уха была способна реагировать на инфекцию путем производства медиаторов воспаления и контролировать вирусную инфекцию до эквивалентных уровней во всех возрастных группах.Эти данные являются дополнительным доказательством того, что меньшее привлечение клеток в ткань уха у мышей 54 wo, вероятно, было связано с уменьшенной доступностью циркулирующих клеток, а не с изменениями в местных ответах в инфицированной ткани. Таким образом, функционально иммунный ответ на i.d. вакцинация VACV сохранялась у 54 мышей, и способность контролировать репликацию VACV в месте инфицирования была одинаковой для 7, 22 и 54 групп.

У мышей в возрасте пятидесяти четырех недель наблюдается усиленный цитокиновый ответ на внутрикожную инфекцию VACV в дренирующих лимфатических узлах

Чтобы изучить влияние возраста на адаптивный иммунный ответ на вакцинацию VACV, через 7 дней после i.d. инфекционное заболевание. Это показало тенденцию к снижению абсолютного количества VACV-специфических CD8 Т-клеток у мышей из 54 мышей по сравнению с группами из 22 и 7 человек (рис. 4A). Однако количество В-клеток зародышевого центра (ГЦ) и Т-фолликулярных хелперных (Tfh) лимфоцитов существенно не различалось между всеми группами (Фигуры 4B, C).

Рисунок 4 . Повышенная продукция цитокинов в дренирующих лимфатических узлах (dLN) мышей из 54 мышей после внутрикожной инфекции VACV. Были инфицированы группы из 7, 22 и 54 мышей ( n, = 4-5 на группу) i.d. с VACV и через 7 дней после инфицирования собирали dLN. Абсолютное количество (A) VACV-специфических CD8 T-клеток, (B) B-клеток зародышевого центра и (C) T фолликулярных вспомогательных клеток определяли с помощью FACS. GC, зародышевый центр; Tfh, T фолликулярный помощник; NS, несущественная по критерию Манна-Уитни. (D) Уровни цитокинов и хемокинов определяли с помощью мультиплексного анализа (Luminex) в цервикальном dLN мышей, обработанных, как описано выше. Показаны медианы; пунктирными линиями обозначен предел чувствительности; p -значения были определены с помощью теста Манна-Уитни, * p <0.05, ** р <0,01. Эксперимент проводился дважды, и показаны репрезентативные данные одного эксперимента.

Затем уровни цитокинов и хемокинов в dLN были измерены через 7 дней после вакцинации. Среди 17 различных оцениваемых молекул были обнаружены IFNγ, IL-33, CCL2, CCL3, CCL4, CCL5, CCL7 и CXCL1 (рис. 4D), а уровни IFNγ, CCL2 и CCL5 были значительно выше у 54-ти животных, чем у животных. более молодые мыши, тогда как остальные были одинаковыми во всех группах.Таким образом, dLN старых животных хорошо реагировали на вакцинацию VACV, экспрессируя высокие уровни медиаторов воспаления и генерируя соответствующие клеточные адаптивные иммунные ответы.

Вакцинация VACV вызывает сильный адаптивный иммунный ответ у мышей разного возраста

Затем мы сравнили реакции клеточной и гуморальной памяти, вызванные вакцинацией VACV. Селезенки и образцы крови получали у мышей через 29 дней после вакцинации, 7-, 22- и 54-летних, а также у имитационно вакцинированных животных.Общее количество CD8 T-клеток селезенки было эквивалентным в трех вакцинированных группах, в то время как абсолютное количество CD4 T-клеток было немного снижено у 54 мышей по сравнению с 7 и 22 группами (рис. 5A). Наиболее выраженные изменения в количестве Т-субпопуляций CD8 и CD4 селезенки наблюдались для эффекторных Т-клеток. По сравнению с исходными параметрами до вакцинации, эффекторные CD8 и CD4 Т-лимфоциты значительно увеличились в результате вакцинации для всех групп мышей (Фигуры 2B, 5B).Примечательно, что эффекторные Т-клетки в группе из 54 человек увеличивались пропорционально больше, чем в более молодых группах. Однако анализ VACV-специфических CD8 Т-клеток показал, что их абсолютное количество было сопоставимо во всех возрастных группах (рис. 5C). Что касается гуморального иммунного ответа, способность сыворотки нейтрализовать VACV была идентична во всех трех группах (рис. 5D). Эти наблюдения показывают, что вакцинация VACV генерирует иммунитет памяти у 54-ти мышей, который количественно неотличим от иммунитета, генерируемого у 7- или 22-х мышей.

Рисунок 5 . Вакцинация VACV вызывает устойчивый адаптивный иммунный ответ у мышей разного возраста. Образцы селезенки и сыворотки были получены от вакцинированных и наивных (имитационно вакцинированных) мышей разного возраста через 29 дней после i.d. инъекция ( n = 4-5 животных в группе). (A) Показаны абсолютные числа всех CD8 и CD4 Т-клеток селезенки и (B) их субпопуляций. Наивная центральная память (CM) и эффекторная (Eff). (C) Показывает VACV-специфические CD8 Т-клетки. P -значения определяли с помощью теста Манна-Уитни, * p <0,05. NS, не имеет значения. (D) Ответы нейтрализующих антител, определенные с помощью теста нейтрализации уменьшения образования бляшек. IC50 — половина максимальной ингибирующей концентрации; NS, несущественная по критерию Манна-Уитни. Все эксперименты были выполнены дважды, и показаны репрезентативные данные одного эксперимента.

Пятидесятичетырехнедельные мыши лучше защищены от интраназального заражения VACV, чем мыши из более молодых групп

Чтобы измерить способность вакцинированных групп реагировать на повторное инфицирование, три возрастные группы вакцинированных животных и молодых наивных мышей были заражены i.п. с дозой VACV, эквивалентной ~ 300 LD50. Все вакцинированные группы имели легкую или умеренную потерю веса (максимум около 15%) после заражения с последующим полным выздоровлением. Напротив, у наивных имитационно вакцинированных мышей потеря веса составляла> 25%, и их отбирали по гуманной конечной точке (рис. 6А). Примечательно, что после заражения мыши из 54 животных потеряли меньшую массу тела и выздоровели быстрее, чем группы молодого и среднего возраста. Результаты измерения вирусной нагрузки в легких зараженных мышей показали, что мыши с 54 яйцами избавились от вируса быстрее, чем другие группы (фигура 6B).У большинства иммунизированных пожилых мышей копии генома VACV не были обнаружены в легких через 24 часа после внутривенного введения. вызов. Интересно, что мыши с 22-мя мышами медленнее, чем 7- и 54-го групп, избавлялись от вируса, несмотря на то, что после контрольного заражения потеря веса была схожей между 7- и 22-мя группами (Фигуры 6A, B). Важно отметить, что, несмотря на разницу в исходной массе тела между разными возрастными группами мышей, измеренную до интраназального заражения (дополнительная фигура 9A), этот фактор не влиял на изменение веса и вирусную нагрузку в легких после заражения (дополнительные рисунки 9B). , В).

Рисунок 6 . Пятидесяти четырехнедельные мыши лучше защищены от интраназального заражения VACV, чем мыши из более молодых групп. Группам из 7, 22 и 54 мышей C57BL / 6 ( n = 4-5 на группу) внутрикожно вводили 10 ⁴ БОЕ (на ухо, в оба уха) VACV или PBS (имитация ). Затем этим группам был предложен вызов i.n. с 0,7 × 10 ⁷ БОЕ VACV WR на 33 день после вакцинации в эксперименте № 1 (слева) и с 1,3 × 10 ⁷ БОЕ VACV WR в эксперименте № 2 (справа). (A) Изменения массы тела мышей после интраназального введения VACV; внутри каждой группы данные показывают сравнение веса каждой мыши с весом того же животного в нулевой день. Процентное соотношение для каждой группы является средним с SEM. Статистический анализ с помощью теста RM ANOVA. NS, незначительно; * p <0,05, *** p <0,0001. (B) Число копий вирусного генома в обоих легких мышей через 12, 24 и 48 ч после внутривенного введения. провокацию определяли с помощью КПЦР.Показаны медианы.

Наконец, были измерены уровни медиаторов воспаления в легочной ткани вакцинированных и наивных мышей (фигура 7, дополнительная фигура 10). Базовые уровни до i.n. инфекция существенно не различалась между группами. По сравнению с наивными мышами все вакцинированные животные очень быстро реагировали на внутривенную инфекцию. Всего через 12 часов после заражения уровни IFNγ, CCL7, CXCL1, CXCL2, CXCL10 существенно выросли (дополнительный рисунок 10), хотя между разными возрастными группами не было больших различий.Только CXCL1 был повышен у пожилых мышей, а уровни IFNγ имели тенденцию быть выше у старых мышей и мышей среднего возраста, чем у молодых животных. Через 24 часа после заражения у пожилых мышей уровень большинства цитокинов и хемокинов в легких был снижен по сравнению с другими вакцинированными возрастными группами. Более того, через 48 часов после контрольного заражения уровни медиаторов воспаления в группе 54-х недель еще больше снизились и начали возвращаться к исходным (исходным) концентрациям. Это может отражать более быстрое удаление вирусов.Таким образом, результаты измерения потери веса, вирусной нагрузки и динамики цитокинов в легких показывают, что мыши, вакцинированные в возрасте 54 лет, имели надежную защиту от повторного заражения летальной дозой VACV, и эта защита была даже сильнее, чем у вакцинированных мышей. когда 7- и 22-ух.

Рисунок 7 . Кинетика продукции цитокинов и хемокинов в легких после интраназального введения VACV коррелирует с кинетикой выведения вируса. Группы ( n, = 4-5) мышей C57BL / 6 длиной 7, 22 и 54 человека были вакцинированы i.d. с 10 ⁴ БОЕ (на ухо, в оба уха) VACV или PBS (фиктивный контроль). Затем через 33 дня после вакцинации животных заражали внутримышечно. с VACV WR. Легкие вакцинированных и ложно вакцинированных мышей собирали через 12, 24 и 48 часов после заражения. Уровни цитокинов и хемокинов измеряли с помощью мультиплексного анализа (Luminex). Данные показаны как кратное изменение для вакцинированной группы из 7 человек, которой присвоено значение 1. Показаны средние значения; p -значения определяли с помощью теста Манна-Уитни.* p <0,05 между 7 и 54 животными, # p <0,05 между 22 и 54 мышами. Эксперимент проводился дважды, и показаны данные одного репрезентативного эксперимента.

Обсуждение

В данном исследовании мы показываем, что i.d. вакцинация VACV приводит к успешному развитию иммунологической памяти у старых мышей с иммуно-стареющим фенотипом. Удивительно, но, несмотря на общее снижение количества наивных клеток CD8 и CD4 (рис. 2), снижение набора иммунных клеток в сайт i.d. инфекции (рис. 3A, B) и воспалительных признаков, характерных для явления, иногда известного как воспаление (рис. 3C, 4D), 54-недельные мыши продемонстрировали лучшую эффективность вакцинации против заражения, чем более молодые животные.

Вакцинация людей VACV приводит к длительной иммунологической памяти даже после введения разовой дозы вакцины (23, 24, 34), а ее высокая эффективность подтверждена искоренением оспы. Имеется мало информации об эффективности вакцины VACV у пожилых людей или мышей.В одном исследовании сообщается, что вакцинация старых мышей BALB / c рекомбинантным VACV, экспрессирующим гемагглютинин гриппа, была эффективной для образования антител к гемагглютинину и специфичных для гриппа цитотоксических Т-клеток (35). Основа высокой иммуногенности VACV неизвестна. Однако местная иммуносупрессия с помощью VACV позволяет вирусу реплицироваться в месте инфекции в течение как минимум 12 дней после внутримышечной вакцинации (26). Этот расширенный период репликации обеспечивает постоянное воздействие антигена на иммунную систему, вероятно, способствуя формированию сильной иммунологической памяти.Это подавление иммунитета может быть опосредовано количеством иммуномодулирующих белков, экспрессируемых VACV сразу после заражения (21, 36). Многие иммуномодуляторы VACV нацелены на рецептор распознавания образов и передачу сигналов рецептора интерферона, чтобы блокировать противовирусные ответы в инфицированных клетках. В моделях вакцинации делеция двух или трех таких генов приводит к повышенной безопасности, но снижает иммуногенность вакцины и снижает защиту от заражения (28). Высокоаттенуированный штамм VACV, модифицированный осповакциной Ankara (MVA), репликация которой недостаточна для многих типов клеток, приводит к образованию значительно более низких титров антител по сравнению с WR (37, 38).Это может объяснить эффективность VACV в развитии устойчивой иммунологической памяти даже у старых мышей. Однако это не объясняет, почему у старых мышей наблюдалась лучшая защита от заражения, чем у более молодых. В будущем будет полезно распространить это исследование на другие линии мышей и другие модели инфекции, чтобы понять, насколько широк этот фенотип.

Одной из особенностей иммунной системы пожилых людей является наличие хронического воспаления слабой степени, которое иногда называют воспалением (39).Характерными чертами этого феномена являются повышенная активность NF-κB (40, 41), повышенные уровни провоспалительных цитокинов и хемокинов, таких как TNFα, IL-1, IL-6, IL-8, IL-12, CCL2, CXCL10 (42 ), накопление связанных с повреждениями молекулярных паттернов и дисфункциональных органелл (43), а также изменения кишечной микробиоты и метаболизма (44). Этот феномен может каким-то образом объяснить усиление продукции регулируемых NF-κB цитокинов TNFα и IL-6 в тканях уха, инфицированных VACV, у мышей 54-wo мышей (рис. 3C), а также CCL2 в dLN (рис. 4D).Лиганды суперсемейства IL-6 и TNF действуют как адъюванты и повышают иммуногенность вакцин (45, 46). Следовательно, в случае вакцинации VACV воспаление может быть полезным за счет предоставления дополнительных провоспалительных стимулов для запуска каскада событий, ведущих к развитию иммунной памяти.

Повышенная продукция TNFα и IL-6 наряду с низким уровнем IL-10 (рис. 3C) у старых животных после i.d. вакцинация, может компенсировать снижение набора иммунных клеток в место вакцинации (рис. 3А).Это может способствовать борьбе с вирусной инфекцией после i.d. инфекции (рис. 3D) и обеспечивают адекватные условия для генерации иммунологической памяти. Примечательно, что количество Tfh и GC B-клеток в dLN (рисунки 4B, C), а также VACV-специфических CD8 T-клеток в селезенке и уровни нейтрализующих антител (рисунки 5C, D) были одинаковыми во всех возрастных группах. Тем не менее, неясно, как старые мыши достигли более быстрого выведения VACV и снижения потери веса после заражения (Фигуры 6A, B).У пожилых людей существуют дополнительные смешивающие факторы, которые могут влиять на эффективность вакцинации, такие как наличие длительных латентных вирусных инфекций, таких как EBV и HCMV. Используемая здесь модель не учитывает это, потому что мышей содержали в условиях SPF.

Наши результаты показывают, что абсолютное количество эффекторных Т-лимфоцитов CD8 в селезенке значительно и пропорционально увеличилось в пожилой группе, чем у более молодых мышей (рисунки 2B, 5B). Это нельзя объяснить просто увеличением количества VACV-специфических CD8 T-клеток селезенки (которые были идентифицированы с помощью окрашивания декстрамером MHC-I), потому что их абсолютное количество слишком низкое и одинаковое для всех трех возрастных групп (рис. 5C).Это различие может быть связано с размножением VACV-специфических Т-лимфоцитов CD8 против различных эпитопов VACV и / или размножением низкоаффинных Т-клеток CD8, которые не были распознаны типом декстрамеров MHC-I, использованных в этом исследовании. Эти клетки могут способствовать быстрому выведению VACV у пожилых людей после заражения. Кроме того, несмотря на многочисленные публикации, описывающие функциональную неэффективность стареющих эффекторных Т-клеток, есть сообщения о том, что эффекторные Т-клетки пожилых людей могут иметь лучший иммунный ответ на стимуляцию антигеном, чем более молодые аналоги (47–49).

В заключение, это исследование демонстрирует, что вакцинация мышей пожилого возраста очень эффективна и не уступает более молодым животным. Иммунитет и воспаление можно более точно рассматривать как иммуноадаптацию и иммуноремоделирование в пожилом возрасте, а не просто как медленное снижение функции иммунной системы (50, 51). Большинство вакцин были созданы и используются для детей и молодых людей (6), и необходимы вакцины, предназначенные для пожилого населения, которые учитывают специфические характеристики иммунной системы в пожилом возрасте.Учитывая эффективность вакцинации VACV, показанную в текущем исследовании, необходимы дальнейшие исследования для понимания механизмов ее высокой иммуногенности.

Доступность данных

Исходные данные, подтверждающие выводы этой рукописи, будут предоставлены авторами без излишних оговорок любому квалифицированному исследователю.

Заявление об этике

Исследование на животных было рассмотрено и одобрено Комитетом Кембриджского университета по защите животных и этике (AWERB).Все протоколы и процедуры были одобрены Министерством внутренних дел Великобритании и выполнялись по лицензии проекта PPL 70/8524.

Авторские взносы

GS и BF предоставили финансирование и руководили работами. ES провел все эксперименты и статистический анализ. ES, GS и BF разработали исследование и написали рукопись.

Финансирование

Это исследование было поддержано грантом проекта MRC RG77505 GS и BF. GS был главным научным сотрудником Wellcome Trust.

Заявление о конфликте интересов

Авторы заявляют, что исследование проводилось при отсутствии каких-либо коммерческих или финансовых отношений, которые могут быть истолкованы как потенциальный конфликт интересов.

Благодарности

Мы благодарим доктора Брайана М. Уорда (Медицинский центр Университета Рочестера, США) за предоставление плазмиды, содержащей ген VACV E9L . Также мы благодарим доктора Мишель А. Линтерман из Института Бабрахама, Кембридж, Великобритания, за полезное обсуждение. Эта рукопись была выпущена в качестве препринта на BioRxiv (52).

Дополнительные материалы

Дополнительные материалы к этой статье можно найти в Интернете по адресу: https: //www.frontiersin.org / article / 10.3389 / fimmu.2019.01780 / full # additional-material

Список литературы

5. Чен У.Х., Козловский Б.Ф., Эффрос Р.Б., Грубек-Лебенштейн Б., Эдельман Р., Штейн МБ. Вакцинация пожилых людей: иммунологическая перспектива. Trends Immunol. (2009) 30: 351–9. DOI: 10.1016 / j.it.2009.05.002

PubMed Аннотация | CrossRef Полный текст | Google Scholar

6. Чиабаттини А., Нардини С., Санторо Ф., Гарагнани П., Франчески С., Медаглини Д. Вакцинация пожилых людей: проблема иммунных изменений с возрастом. Semin Immunol. (2018) 40: 83–94. DOI: 10.1016 / j.smim.2018.10.010

PubMed Аннотация | CrossRef Полный текст | Google Scholar

7. Гудвин К., Вибоуд К., Симонсен Л. Антителный ответ на вакцинацию против гриппа у пожилых людей: количественный обзор. Вакцина. (2006) 24: 1159–69. DOI: 10.1016 / j.vaccine.2005.08.105

PubMed Аннотация | CrossRef Полный текст | Google Scholar

8. Олово Тин Хтар М., Стурман А.Л., Феррейра Дж., Аличино С., Боллаертс К., Паганино С. и др.Эффективность пневмококковых вакцин в профилактике пневмонии у взрослых, систематический обзор и метаанализ обсервационных исследований. PLoS ONE. (2017) 12: e0177985. DOI: 10.1371 / journal.pone.0177985

PubMed Аннотация | CrossRef Полный текст | Google Scholar

9. Вестон В.М., Фридланд Л.Р., Ву X, Хоу Б. Вакцинация взрослых в возрасте 65 лет и старше столбнячным анатоксином, редуцированным дифтерийным анатоксином и бесклеточной коклюшной вакциной [Boostrix ( ^® )]: результаты двух рандомизированных испытаний. Вакцина. (2012) 30: 1721–8. DOI: 10.1016 / j.vaccine.2011.12.055

CrossRef Полный текст | Google Scholar

15. Меткалф Т.У., Кубас Р.А., Гнейм К., Картрайт М.Дж., Гревенинге СП, Ричнер Дж.М. и др. Глобальный анализ выявил возрастные изменения врожденных иммунных ответов после стимуляции рецепторов распознавания патогенов. Ячейка старения. (2015) 14: 421–32. DOI: 10.1111 / acel.12320

PubMed Аннотация | CrossRef Полный текст | Google Scholar

17.Генри С., Чжэн Нью-Йорк, Хуанг М., Кабанов А., Рохас К.Т., Каур К. и др. Вакцинация против вируса гриппа вызывает у пожилых людей плохо адаптированные В-клеточные реакции. Клеточный микроб-хозяин. (2019) 25: 357–66.e6. DOI: 10.1016 / j.chom.2019.01.002

PubMed Аннотация | CrossRef Полный текст | Google Scholar

18. Мосс Б. (2013), Poxviridae, в Fields Virology , под редакцией Б. Н. Филдса, Д. М. Книпа и П. М. Хоули, стр. 2129–2159, Филадельфия: Wolters Kluwer Health / Lippincott Williams & Wilkins.

19. Феннер Ф.Д. А. Хендерсон, И. Арита, З. Джезек и И. Д. Ладный (1988), Оспа и ее искоренение , 1460 стр., Всемирная организация здравоохранения

20. Goebel SJ, Johnson GP, ​​Perkus ME, Davis SW, Winslow JP, Paoletti E. Полная последовательность ДНК вируса осповакцины. Вирусология. (1990) 179: 247–66; 517–63. DOI: 10.1016 / 0042-6822 (90)

-2

PubMed Аннотация | CrossRef Полный текст | Google Scholar

21. Смит Г.Л., Бенфилд С.Т., Малукер де Мотес К., Маццон М., Эмбер С.В., Фергюсон Б.Дж. и др.Иммунное уклонение от вируса осповакцины: механизмы, вирулентность и иммуногенность. J Gen Virol. (2013) 94 (Pt 11): 2367–92. DOI: 10.1099 / vir.0.055921-0

PubMed Аннотация | CrossRef Полный текст | Google Scholar

22. Беляков И.М., Эрл П., Дзуцев А., Кузнецов В.А., Лимон М., Вятт Л.С. и др. Общие способы защиты от поксвирусной инфекции аттенуированными и обычными вирусами противооспенной вакцины. Proc Natl Acad Sci USA. (2003) 100: 9458–63. DOI: 10.1073 / pnas.1233578100

PubMed Аннотация | CrossRef Полный текст | Google Scholar

23. Crotty S, Felgner P, Davies H, Glidewell J, Villarreal L, Ahmed R. Передний край: долговременная В-клеточная память у людей после вакцинации против оспы. J Immunol. (2003) 171: 4969–73. DOI: 10.4049 / jimmunol.171.10.4969

PubMed Аннотация | CrossRef Полный текст | Google Scholar

24. Тауб Д.Д., Эршлер В.Б., Яновски М., Арц А., Кей М.Л., МакКелви Дж. И др. Иммунитет от противооспенной вакцины сохраняется на протяжении десятилетий: продолжительное исследование. Am J Med. (2008) 121: 1058–64. DOI: 10.1016 / j.amjmed.2008.08.019

PubMed Аннотация | CrossRef Полный текст | Google Scholar

25. Сюй Р., Джонсон А.Дж., Лиггитт Д., Беван М.Дж. Клеточный и гуморальный иммунитет против заражения вирусом осповакцины мышей. J Immunol. (2004) 172: 6265–71. DOI: 10.4049 / jimmunol.172.10.6265

PubMed Аннотация | CrossRef Полный текст | Google Scholar

26. Tscharke DC, Smith GL. Модель патогенеза вируса осповакцины и иммунитета на основе внутрикожной инъекции ушных раковин мышей. J Gen Virol. (1999) 80 (Pt 10): 2751–5. DOI: 10.1099 / 0022-1317-80-10-2751

PubMed Аннотация | CrossRef Полный текст | Google Scholar

27. Самнер Р.П., Рен Х., Смит Г.Л. Удаление иммуномодулятора C6 из штамма вируса осповакцины Western Reserve повышает иммуногенность вируса и эффективность вакцины. J Gen Virol. (2013) 94 (Pt 5): 1121–6. DOI: 10.1099 / vir.0.049700-0

PubMed Аннотация | CrossRef Полный текст | Google Scholar

28. Самнер Р.П., Рен Х., Фергюсон Б.Дж., Смит Г.Л.Повышенное ослабление, но снижение иммуногенности за счет делеции нескольких иммуномодуляторов вируса осповакцины. Вакцина. (2016) 34: 4827–34. DOI: 10.1016 / j.vaccine.2016.08.002

PubMed Аннотация | CrossRef Полный текст | Google Scholar

29. Андерсон К.Г., Майер-Барбер К., Сунг Х., Беура Л., Джеймс Б.Р., Тейлор Дж. Дж. И др. Внутрисосудистое окрашивание для различения лейкоцитов сосудов и тканей. Nat Protoc. (2014) 9: 209–22. DOI: 10.1038 / nprot.2014.005

PubMed Аннотация | CrossRef Полный текст | Google Scholar

30.Бейкер Дж. Л., Уорд Б. М.. Разработка и сравнение количественного анализа ПЦР в реальном времени TaqMan-MGB с тремя другими методами количественного определения вирионов осповакцины. J Virol Methods. (2014) 196: 126–32. DOI: 10.1016 / j.jviromet.2013.10.026

PubMed Аннотация | CrossRef Полный текст | Google Scholar

31. Рен Х, Фергюсон Б.Дж., Малукер де Мотес К., Самнер Р.П., Харман Л.Е., Смит Г.Л. Улучшение памяти CD8 (+) Т-клеток путем удаления ингибитора ядерного фактора вируса осповакцины κB. Иммунология. (2015) 145: 34–49. DOI: 10.1111 / imm.12422

PubMed Аннотация | CrossRef Полный текст | Google Scholar

32. Линч Е.П., Голдберг Г.Л., Чиджи А., Ван ден Бринк М.Р., Бойд Р., Семповски Г.Д. Инволюция тимуса и восстановление иммунитета. Trends Immunol. (2009) 30: 366–73. DOI: 10.1016 / j.it.2009.04.003

PubMed Аннотация | CrossRef Полный текст | Google Scholar

33. Йом Й.Х., Хорват Т.Л., Мангельсдорф Д.Д., Кливер С.А., Диксит В.Д. Гормон долголетия FGF21 защищает от иммунного старения, задерживая возрастную инволюцию тимуса. Proc Natl Acad Sci USA. (2016) 113: 1026–31. DOI: 10.1073 / pnas.1514511113

PubMed Аннотация | CrossRef Полный текст | Google Scholar

34. Пютц М.М., Альберини И., Мидгли С.М., Манини И., Монтомоли Э., Смит Г.Л. Распространенность антител к вирусу осповакцины после вакцинации против оспы в Италии. J Gen Virol. (2005) 86 (Pt 11): 2955–60. DOI: 10.1099 / vir.0.81265-0

PubMed Аннотация | CrossRef Полный текст | Google Scholar

35. Бен-Иегуда А., Элейтер Д., Ху А.Р., Векслер М.Э.Рекомбинантный вирус осповакцины, экспрессирующий ген гемагглютинина гриппа PR / 8, преодолевает ослабленный иммунный ответ и повышенную восприимчивость старых мышей к инфекции гриппа. J Infect Dis. (1993) 168: 352–7. DOI: 10.1093 / infdis / 168.2.352

PubMed Аннотация | CrossRef Полный текст | Google Scholar

37. de Freitas LFD, Oliveira RP, Miranda MCG, Rocha RP, Barbosa-Stancioli EF, Faria AMC и др. Вирулентность различных штаммов вируса осповакцины прямо пропорциональна их способности подавлять определенные клеточно-опосредованные иммунные компартменты. J Virol. (2019) 93: e02191-18. DOI: 10.1128 / JVI.02191-18

PubMed Аннотация | CrossRef Полный текст | Google Scholar

38. Рамирес Дж. К., Герарди М. М., Эстебан М. Биология аттенуированного модифицированного рекомбинантного вектора вируса осповакцины Анкара у мышей: судьба вируса и активация B- и T-клеточного иммунного ответа по сравнению со штаммом Western Reserve и преимущества в качестве вакцины. J Virol. (2000) 74: 923–33. DOI: 10.1128 / JVI.74.2.923-933.2000

PubMed Аннотация | CrossRef Полный текст | Google Scholar

41.Тильстра Дж.С., Клаусон С.Л., Нидернхофер Л.Дж., Роббинс П.Д. NF-κB при старении и болезнях. Aging Dis. (2011) 2: 449–65.

PubMed Аннотация | Google Scholar

42. Минчиулло П.Л., Каталано А., Мандраффино Г., Кашаро М., Круситти А., Мальтийский Г. и др. Воспаление и противовоспалительное действие: роль цитокинов в долголетии. Arch Immunol Ther Exp. (2016) 64: 111–26. DOI: 10.1007 / s00005-015-0377-3

PubMed Аннотация | CrossRef Полный текст | Google Scholar

44.Франчески К., Гарагнани П., Парини П., Джулиани С., Санторо А. Воспаление: новая иммуно-метаболическая точка зрения на возрастные заболевания. Nat Rev Endocrinol. (2018) 14: 576–90. DOI: 10.1038 / s41574-018-0059-4

PubMed Аннотация | CrossRef Полный текст | Google Scholar

45. Гупта С., Термини Дж. М., Канагавелу С., Стоун Г. В.. Дизайн вакцинных адъювантов, включающих лиганды суперсемейства TNF и молекулярные имитаторы суперсемейства TNF. Immunol Res. (2013) 57: 303–10. DOI: 10.1007 / с12026-013-8443-6

PubMed Аннотация | CrossRef Полный текст | Google Scholar

46. Ло Дж., Чжан Б., Ву И, Тянь Ц., Чжао Дж., Лю З. и др. Экспрессия интерлейкина-6 рекомбинантным вирусом бешенства повышает его иммуногенность как потенциальной вакцины. Вакцина. (2017) 35: 938–44. DOI: 10.1016 / j.vaccine.2016.12.069

PubMed Аннотация | CrossRef Полный текст | Google Scholar

47. Чен Г., Лустиг А., Вен Н. П.. Старение Т-клеток: обзор изменений транскрипции, определенных в результате полногеномного анализа. Front Immunol. (2013) 4: 121. DOI: 10.3389 / fimmu.2013.00121

PubMed Аннотация | CrossRef Полный текст | Google Scholar

48. Весковини Р., Биазини С., Фаньони Ф.Ф., Телера А.Р., Занлари Л., Педраццони М. и др. Массивная нагрузка функциональных эффекторных Т-лимфоцитов CD4 + и CD8 + против цитомегаловируса у очень старых субъектов. J Immunol. (2007) 179: 4283–91. DOI: 10.4049 / jimmunol.179.6.4283

PubMed Аннотация | CrossRef Полный текст | Google Scholar

50.Franceschi C, Salvioli S, Garagnani P, de Eguileor M, Monti D, Capri M. Иммунобиография и неоднородность иммунных ответов у пожилых людей: акцент на воспаление и тренированный иммунитет. Front Immunol. (2017) 8: 982. DOI: 10.3389 / fimmu.2017.00982

PubMed Аннотация | CrossRef Полный текст | Google Scholar

51. Fulop T, Larbi A, Dupuis G, Le Page A, Frost EH, Cohen AA, et al.